[發明專利]提高萊鮑迪苷A1G含量的結晶法、其產品及用途

在審

• 申請號: 201810698143.2
• 申請日: 2018-06-29
• 公開（公告）號: CN108727443A
• 公開（公告）日: 2018-11-02
• 發明（設計）人: 朱理平;杜國營;岳文艷;肖敏;徐莉;王文正;彭鵬
• 申請（專利權）人: 東臺市浩瑞生物科技有限公司
• 主分類號: C07H15/256
• 分類號: C07H15/256;C07H1/06;A23L2/60;A23L27/30;A23L33/125;A61K47/26;A61K8/60;A61Q11/00
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 楊昀

本文涉及提高萊鮑迪苷A1G含量的結晶法、其產品及用途。本文中采用多次結晶的方法(例如二次、三次等)，對于甜菊糖苷萊鮑迪苷A(RA)衍生產物RA1G進行了純化，獲得了口感改善的高純度RA1G。并且，結晶液相還可循環利用到進一步生產中，節約了生產成本。本發明的方法操作簡單，生產工藝綠色環保，成本低，周期短，轉化效率高，所得產品口感好，于食品與飲料等行業具有重要的應用價值。

技術領域

本發明屬于生物技術和食品化工技術領域。具體而言，本發明涉及一種用于提高萊鮑迪苷A酶改性產物中萊鮑迪苷A1G含量的結晶方法及其產品和用途。

背景技術

甜菊糖苷是一系列從菊科草本植物甜葉菊(Stevia rebaudiana Bertoni)的葉中提取出的糖苷類物質，其中天然產物中占主要含量的為甜菊苷(Stevioside，縮寫為Stv)和萊鮑迪苷A(Rebaudioside A，縮寫為RA，也稱為甜菊雙糖苷A)。

萊鮑迪苷A的分子結構如下所示，是一種含20個碳原子的四環二萜類糖苷物質，其由二萜核心在C19位上連接一個葡糖基和C13為上連接3個葡糖基而形成：

研究表明，萊鮑迪苷A的甜度是蔗糖的200-300倍，熱量僅為蔗糖的1/300，對酸、堿、熱都很穩定，長期儲存不易變質，加入食品中經熱處理也不會有褐變現象，且不容易造成齲齒。我國在《GB8270-2014食品安全國家標準》和《GB2760-2014食品安全國家標準》的國家標準中對其做作為食品添加劑的使用進行了詳細說明。2009年，美國食品藥品監督管理局FDA也認可萊鮑迪苷A為“GRAS(Generally Recognized as Safe，總體認為是安全的)”的級別。甜菊糖苷類物質作為蔗糖的天然替代品，不僅可以降低成本，同時也符合食品、飲料逐漸向低糖低熱量化發展的要求，是一類非常理想的具有多種用途的綠色甜味劑。

然而，萊鮑迪苷A有嚴重的苦澀后味，影響其在食品中的應用。為了改善其口感，現有技術中利用生物酶改性的方法，以萊鮑迪苷A為受體底物，在其二萜核心C19和C13位上加入不同數量和不同鍵型的葡萄糖、半乳糖等，以獲得口味改善的酶改性產物。萊鮑迪苷A的酶催化改性的產物通常為不同位點和不同數量的糖基化產物的混合物，這就造成了產物組分復雜，口感不均一等問題。并且，由于產物混合物中的組分具有相同的母核，分子結構和極性都非常相近，常規手段很難分離純化。為提高有效產物的濃度，對生產工藝的創新和優化提出了更高的要求。

因此，進一步開發具有較高純度和改善口感的甜菊糖苷衍生產品，并提供其生產工藝以提高有效產物的含量，成為甜菊糖苷工業化生產的發展趨勢。

發明內容

本文正是提供了一種新型甜菊糖衍生物(即萊鮑迪苷A1G)的純化方法以及純化產物，以改善原料口感，以較低的成本和較短的生產周期產出優質的甜菊糖苷衍生物R1G。

在本發明的一些方面中，提供了一種純化如下結構所示的化合物萊鮑迪苷A1G(RA1G)的方法，

所述方法包括：

(a)可選地，對包含RA1G的原料進行純化前預處理；

(b)采用甲醇水溶液為溶劑，對經或未經預處理的包含RA1G的原料進行第一次結晶并進行固液分離；

(c)取前一次結晶所得固相，采用甲醇水溶液為溶劑溶解，并在適當條件下，進行第二次結晶得到純化產物；

(d)可選地，對前次結晶得到的純化產物重復結晶純化一次或多次或采用其他純化方式進行進一步純化；

(e)可選地，將結晶純化步驟中所余的液相循環利用到包含RA1G的原料的制備過程中。