[發明專利]用于腫瘤融合基因EWS-FLI1檢測的引物對、探針、試劑盒及其一步檢測法

在審

• 申請號: 201810697270.0
• 申請日: 2018-06-29
• 公開（公告）號: CN108796085A
• 公開（公告）日: 2018-11-13
• 發明（設計）人: 姚斐;宮小明;馬榮檜;金超
• 申請（專利權）人: 青島普澤麥迪生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 青島清泰聯信知識產權代理有限公司 37256
• 代理人: 高洋;張潔

1.一種用于腫瘤融合基因EWS-FLI1檢測的引物對，其特征在于，包括：

用于融合基因EWS-FLI1 I型融合的如SEQ No.1序列所示的正向引物EWS_F、如SEQNo.2序列所示的反向引物FLI1_Exon 7&8 R；和

用于融合基因EWS-FLI1 II型融合的如SEQ No.1序列所示的正向引物EWS_F、如SEQNo.4序列所示的反向引物FLI1_Exon 6&7 R。

2.一種用于腫瘤融合基因EWS-FLI1檢測的探針，其特征在于，包括：用于融合基因EWS-FLI1 I型融合的如SEQ No.3序列所示的探針PRFAM 7&7 R以及用于融合基因EWS-FLI1 II型融合的如SEQ No.5序列所示的探針PRCy 7&6，其中所述探針帶有發光基團，所述發光基團為FAM或Cy。

3.一種用于腫瘤融合基因EWS-FLI1檢測的試劑盒，其特征在于，包括如權利要求1所述的引物對和如權利要求2所述的探針。

4.一種利用如權利要求3所述的試劑盒對腫瘤融合基因EWS-FLI1進行的一步檢測法，其特征在于，包括以下步驟：

從腫瘤組織中提取Total RNA作為樣品；

利用試劑盒中對應的正向引物、反向引物和探針分別配制樣品的EWS-FLI1 I型融合的PCR反應液和EWS-FLI1 II型融合的PCR反應液，同時配制各自的陰性對照的PCR反應液；

對上述三種PCR反應液分別進行PCR反應，得到EWS-FLI1 I型融合和EWS-FLI1 II型融合的循環交叉點。

5.根據權利要求4所述的一步檢測法，其特征在于，EWS-FLI1 I型融合的PCR反應液具體配制如下：

6.根據權利要求4所述的一步檢測法，其特征在于，EWS-FLI1 II型融合的PCR反應液具體配制如下：

7.根據權利要求5或6所述的一步檢測法，其特征在于，Total RNA的加入量為1pg-10ng。

8.根據權利要求4所述的一步檢測法，其特征在于，PCR反應具體如下：

55℃反轉錄10min；95℃變性1min；然后45個循環，95℃變性10sec，60℃延伸30sec。