[發明專利]用于產生膠原的酵母菌株和方法

在審

• 申請號: 201810695336.2
• 申請日: 2018-06-29
• 公開（公告）號: CN109207387A
• 公開（公告）日: 2019-01-15
• 發明（設計）人: L·戴;J·博登;J·納爾遜;K·魯斯布林-賈斯
• 申請（專利權）人: 現代牧場股份有限公司
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12P21/02;C12N15/81
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 李瑛

1.一種遺傳改造以產生非羥基化膠原的酵母菌株，其包含：

(i)酵母菌株；和

(ii)載體，所述載體包含膠原的DNA序列；膠原啟動子的DNA序列；膠原終止子的DNA序列；選擇標記物的DNA序列、用于所述選擇標記物的啟動子的DNA序列；用于所述選擇標記物的終止子的DNA序列；選自細菌和酵母的復制起點的DNA序列；以及含有與酵母基因組的同源性的DNA序列，其中所述載體已插入所述酵母菌株中或游離型維持。

2.如權利要求1所述的酵母菌株，其中所述酵母菌株是選自由來自以下屬的那些組成的組：阿敘拉屬、假絲酵母屬、駒形氏酵母屬、畢赤氏酵母屬、漢遜酵母屬、歐伽鐵酵母屬、糖酵母屬、隱球菌屬和其組合。

3.如權利要求1所述的酵母菌株，其中所述膠原的DNA序列是選自由以下各項組成的組：牛、豬、袋鼠、鈍吻鱷、鱷魚、大象、長頸鹿、斑馬、駱馬、羊駝、羔羊、恐龍膠原、海洋生物、細菌和其組合。

4.如權利要求3所述的酵母菌株，其中所述膠原的DNA序列是選自天然膠原DNA、改造的膠原DNA和密碼子優化的膠原DNA。

5.如權利要求1所述的酵母菌株，其中所述啟動子的DNA序列是選自由以下各項組成的組：AOX1甲醇誘導的啟動子的DNA、PDF脫阻抑啟動子的DNA、PCAT脫阻抑啟動子的DNA、Das1-Das2甲醇誘導的雙向啟動子的DNA、PHTX1組成型雙向啟動子的DNA、CHO組織蛋白啟動子的DNA、PGCW14-PGAP1組成型雙向啟動子的DNA和其組合。

6.如權利要求1所述的酵母菌株，其中所述選擇標記物的DNA序列是選自由以下各項組成的組：抗生素抗性的DNA和營養缺陷型標記物的DNA。

7.如權利要求6所述的酵母菌株，其中所述抗生素是選自由以下各項組成的組：潮霉素、吉歐霉素、建那霉素和其組合。

8.如權利要求1所述的酵母菌株，其中所述載體通過選自由電穿孔、化學轉化和交配組成的組的方法插入所述酵母中。

9.一種產生非羥基化膠原的方法，其包括：

(i)提供根據權利要求1所述的酵母菌株；以及

(ii)使所述菌株在培養基中生長足以產生膠原的時間段。

10.如權利要求9所述的方法，其中所述酵母菌株是選自由來自以下屬的那些組成的組：阿敘拉屬、假絲酵母屬、駒形氏酵母屬、畢赤氏酵母屬、漢遜酵母屬、歐伽鐵酵母屬、糖酵母屬、隱球菌屬和其組合。

11.如權利要求9所述的方法，其中所述培養基是選自由以下各項組成的組：緩沖的甘油復合培養基(BMGY)、緩沖的甲醇復合培養基(BMMY)和酵母提取物蛋白胨右旋糖(YPD)。

12.如權利要求9所述的方法，其中所述時間段是24小時到72小時。

13.如權利要求12所述的方法，其中所述酵母是選自由來自以下屬的那些組成的組：阿敘拉屬、假絲酵母屬、駒形氏酵母屬、畢赤氏酵母屬、漢遜酵母屬、歐伽鐵酵母屬、糖酵母屬、隱球菌屬和其組合。

14.如權利要求9所述的方法，其中所述膠原的DNA序列是選自由以下各項組成的組：牛、豬、袋鼠、鈍吻鱷、鱷魚、大象、長頸鹿、斑馬、駱馬、羊駝、羔羊、恐龍膠原和其組合。

15.如權利要求9所述的方法，其中所述啟動子的DNA序列是選自由以下各項組成的組：PHTX1組成型雙向啟動子的DNA和PGCW14-PGAP1組成型雙向啟動子的DNA。