[發(fā)明專利]SKH-1小鼠皮膚鱗癌細(xì)胞系及其在移植性瘤模型制備中應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810693753.3
• 申請日: 2018-06-29
• 公開（公告）號: CN110656085B
• 公開（公告）日: 2021-06-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王秀麗;王宏偉;吉杰
• 申請（專利權(quán)）人: 上海市皮膚病醫(yī)院
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;A01K67/027;C12R1/91
• 代理公司: 上?？剖⒅R產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31225
• 代理人: 褚明偉

本發(fā)明公開了SKH?1小鼠皮膚鱗癌細(xì)胞系及其在移植性瘤模型制備中應(yīng)用，命名為XL50，保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號是CCTCC No：C201827。本發(fā)明內(nèi)容包括UV誘導(dǎo)小鼠構(gòu)建SCC模型；原代培養(yǎng)小鼠皮膚鱗癌細(xì)胞XL50；小鼠皮膚鱗癌細(xì)胞XL50成瘤性試驗(yàn)；構(gòu)建SKH?1小鼠移植性皮膚鱗癌模型。本發(fā)明的細(xì)胞生長良好并能連續(xù)傳代，穩(wěn)定增殖，其培養(yǎng)條件、傳代及凍存方法均為常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，便于操作。細(xì)胞的細(xì)胞增殖較快，細(xì)胞惡性度較高。制備出的細(xì)胞株能很好的應(yīng)用于構(gòu)建具有免疫原性的移植性瘤模型，既彌補(bǔ)了原有的小鼠SCC模型建模周期過長和腫瘤的大小的局限性，又彌補(bǔ)了裸鼠移植性腫瘤免疫功能缺乏的不足，為今后SCC相關(guān)免疫機(jī)制的研究提供了一個(gè)很好的模型。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種SKH-1小鼠皮膚鱗癌細(xì)胞系及其在移植性瘤模型中應(yīng)用。

背景技術(shù)

皮膚鱗狀細(xì)胞癌(Squamous Cell Carcinoma，SCC)作為人類常見的皮膚惡性腫瘤之一，約占非黑素性皮膚腫瘤的20％。SCC的發(fā)生與紫外線(Ultraviolet，UV)密切相關(guān)，并且近年來隨著全球環(huán)境破壞導(dǎo)致臭氧層受損加重，SCC的發(fā)病率也逐年上升。由于SCC發(fā)展較快并可發(fā)生轉(zhuǎn)移，預(yù)后較差，已成為威脅人類健康的主要皮膚腫瘤，越來越受到人們的重視。SCC主要與過度UV暴露導(dǎo)致的DNA損傷相關(guān)，但其具體發(fā)生、發(fā)展機(jī)制尚未完全闡明。傳統(tǒng)的治療方法，包括手術(shù)、激光、冷凍和放療等，雖然可以直接去除或破壞腫瘤組織，但仍存在較高復(fù)發(fā)率，如何有效防治SCC并降低其復(fù)發(fā)率是當(dāng)前亟需解決的臨床難題。

人類腫瘤的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制和防治等相關(guān)的基礎(chǔ)研究，均需要與人腫瘤發(fā)生相似的動物模型和細(xì)胞系。體外分離和培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞并建立相關(guān)腫瘤細(xì)胞系，是研究腫瘤的重要資源和手段，有利于促進(jìn)腫瘤相關(guān)的分子細(xì)胞學(xué)機(jī)制和治療藥物療效的研究。體外培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞應(yīng)用研究具有許多優(yōu)點(diǎn)：1)可免受機(jī)體內(nèi)環(huán)境影響避免個(gè)體差異對實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成的影響，有利于分析各種外界因素對腫瘤細(xì)胞的作用；2)一方面可從細(xì)胞水平觀察、研究腫瘤細(xì)胞的結(jié)構(gòu)及功能，另一方面也能在基因及分子水平分析癌變機(jī)理；3)有利于快速耐藥機(jī)理的研究，便于篩選抗癌藥物；4)可縮短研究周期，更加經(jīng)濟(jì)。因此，建立與人SCC發(fā)生相似的腫瘤細(xì)胞系和構(gòu)建合適的動物模型是研究SCC癌變機(jī)理和防治的重要方法。

目前，UV誘導(dǎo)和二甲基苯蒽(7,2-dimethyl-1,2-benz[a]anthracene,DMBA)化學(xué)誘導(dǎo)的小鼠SCC模型是國際上公認(rèn)的經(jīng)典小鼠SCC動物模型，已廣泛用于SCC發(fā)生、發(fā)展機(jī)制的相關(guān)研究。

現(xiàn)有技術(shù)有采用SKH-1無毛小鼠，通過日光紫外線模擬器照射成功構(gòu)建了UV誘發(fā)的小鼠SCC模型。但該造模方法存在建模時(shí)間長，UV所致腫瘤大小不一，腫瘤數(shù)量無法控制等問題，因此構(gòu)建一個(gè)成瘤周期短，可有效控制瘤體體積和數(shù)量的的移植性SCC模型非常必要。

有關(guān)皮膚SCC細(xì)胞系建立的研究可追溯到1975年。1975年Moore成功分離并建立了人SCC細(xì)胞株COLO16，隨后逐漸建立了HSC-I和HSC-Ib，HSC-5，SCL-1，SCC-1CB等人SCC細(xì)胞系，這些細(xì)胞系的建立大大促進(jìn)了SCC相關(guān)分子機(jī)制研究領(lǐng)域的發(fā)展。目前運(yùn)用最多的鱗癌細(xì)胞系為SCL-1細(xì)胞。與口腔、食道、膀胱和肺鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系的建立相比，有關(guān)人皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞系建立的報(bào)道較少，而且很少有與人皮膚鱗狀細(xì)胞系相匹配的直接從小鼠SCC動物模型的SCC組織中分離而建立的細(xì)胞系。2010年Hsieh等報(bào)道了從DMBA/TPA二階段法誘導(dǎo)的骨橋蛋白(Osteopontin，OPN)缺乏小鼠SCC組織中成功分離OPN缺陷小鼠皮膚鱗細(xì)胞系，并通過皮下接種成功構(gòu)建了具有健全免疫力的小鼠SCC種植瘤模型。

OPN是一種磷酸化糖蛋白，最早因其從骨基質(zhì)中分離而得名。OPN與惡性腫瘤細(xì)胞的增殖，侵襲及轉(zhuǎn)移等多種病理過程相關(guān)。來源于OPN缺陷的SCC組織的細(xì)胞系和移植性模型，具有一定的局限性，限制了其在SCC生物學(xué)特性和癌變機(jī)理的研究中的應(yīng)用。因此，建立與人SCC發(fā)生相似的小鼠SCC細(xì)胞系和構(gòu)建具有健全免疫力的小鼠SCC移植性模型是非常必要的。

發(fā)明內(nèi)容