[發明專利]一種縮短瓊脂糖凝膠電泳染色的方法

有效

• 申請號: 201810691855.1
• 申請日: 2018-06-28
• 公開（公告）號: CN108593750B
• 公開（公告）日: 2020-07-28
• 發明（設計）人: 胡標林;吳小燕;李霞;羅世友
• 申請（專利權）人: 江西省農業科學院水稻研究所
• 主分類號: G01N27/447
• 分類號: G01N27/447;G01N1/30
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 夏艷

1.一種縮短瓊脂糖凝膠電泳染色的方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1安裝凝膠盤，包括：

a.將量筒、三角瓶、凝膠盤以及齒試樣格洗凈并晾干；

b.將凝膠盤開口的兩側用膠帶紙密封；

c.將凝膠盤置于水平桌面上，并插上齒試樣格；

步驟2瓊脂糖凝膠的制備，包括

配置新鮮5×TBE電泳緩沖液母液：稱取54g Tris堿和27.5g硼酸，再量取20mL已配置的0.5M EDTA溶液，最后用去離子水定容至1000mL，待用；

配置6×凝膠加樣緩沖液：分別稱取25mg溴酚藍、25mg二甲苯青FF和4g蔗糖，最后用去離子水定容至10mL，待用；

用量筒量取5×TBE電泳緩沖液40mL加水至200mL，配制1×TBE稀釋緩沖液并倒入三角瓶中；

稱取1g-4g Invitrogen瓊脂糖粉末，倒入三角瓶中，配成0.5％-2％濃度瓊脂糖膠液，蓋上牛皮紙，輕輕搖晃三角瓶，使瓊脂糖粉末散開；

將三角瓶放入微波爐中，調整微波爐檔位至中高火，設定時間1min；

取出三角瓶，輕輕搖晃三角瓶，再次放入微波爐中，調整微波爐檔位至中高火，設定時間為90s；

取出三角瓶，輕輕搖晃三角瓶，直至有大氣泡產生時停止，繼續放入微波爐，直至瓊脂糖完全溶解；

步驟3灌膠，包括

a.將磁力攪拌子放入三角瓶中，并將三角瓶置于裝有冷水的容器中，放在磁力攪拌機上攪拌冷卻，

磁力攪拌機攪拌的速度為300r/min-500r/min，以避免產生氣泡；

b.待三角瓶內的瓊脂糖溶液溫度冷卻至50℃-60℃，將瓊脂糖溶液緩慢地倒入凝膠盤中，以免產生氣泡；

c.在每份10μL DNA樣品PCR中加入5μL GelRed試劑與3×稀釋凝膠加樣緩沖液的混合液，放置待用；其中3×稀釋凝膠加樣緩沖液和GelRed染色液混合配比按3000～5000:1進行混合；

d.將電泳槽置于水平桌面上，并調整至水平狀態，加入2000mL的1×TBE稀釋電泳緩沖液于電泳槽內；

e.45-60分鐘待凝膠凝固后，撕開膠帶密封紙，將凝膠盤轉移到電泳槽中，拔出齒試樣格，并將齒試樣格洗凈；

步驟4加樣，包括

吸取3μL DNA樣品PCR擴增產物、GelRed試劑和3×稀釋凝膠加樣緩沖液的混合液加入瓊脂糖膠膠孔中，在待測樣品左側的樣品孔中加入3μL的DNA分子量標記，用作分子量參照；

步驟5電泳，包括

蓋上電泳槽的蓋子，接上電源連接線，打開電泳儀的電源開關，將按鈕調到“打開”狀態以及“電壓”模式，選擇電壓100V；

將“電壓”檔調整至0V，再將按鈕調到“關閉”的狀態，并關閉電源開關；

步驟6觀察，包括

a.打開電腦中的成像軟件，接上凝膠成像系統的電源；

b.戴上手套，將凝膠盤轉移到紫外燈臺上，取下手套，關閉成像系統的門；

c.打開紫外燈的開關，選擇成像軟件“菜單”下的“預覽”功能，調整曝光時間，單擊“拍照”按鈕，獲取圖像，并保存；

d.關閉紫外燈的開關，斷開凝膠成像系統的電源，打開成像系統的門；

e.戴上手套，從凝膠盤中將凝膠取出，棄于垃圾袋中，用吸水紙將紫外燈搽拭干凈，取下手套；

f.關上成像系統的門，關閉電腦。

2.根據權利要求1所述的一種縮短瓊脂糖凝膠電泳染色的方法，其特征在于，所述的步驟2瓊脂糖凝膠的制備中從微波爐中取出三角瓶時需戴上防護手套。

3.根據權利要求1所述的一種縮短瓊脂糖凝膠電泳染色的方法，其特征在于，所述的步驟3灌膠中1x TBE稀釋緩沖液需浸沒凝膠表面1～2mm。