[發明專利]一種水稻DNA的簡易提取方法

在審

• 申請號: 201810691119.6
• 申請日: 2018-06-28
• 公開（公告）號: CN108642051A
• 公開（公告）日: 2018-10-12
• 發明（設計）人: 胡標林;陳春蓮;羅潮洲;彭東華
• 申請（專利權）人: 江西省農業科學院水稻研究所
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 夏艷

本發明提供了一種水稻DNA的簡易提取方法，包括：將剪碎的葉片在研磨儀上震蕩研磨，加入氯仿顛倒混勻后離心至分相，取上清加入冰無水乙醇，離心至沉淀附于離心管底部，棄上清，用70％乙醇洗滌沉淀，自然干燥，用1/10×TE緩沖液溶解沉淀，保存備用。本發明方法提取的DNA具有產率高、質量好、成本低且較為安全等特點。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種水稻DNA的簡易提取方法。

背景技術

水稻是世界上最主要的三大糧食作物之一，有著豐富和深入的基因組研究基礎，其中DNA的制備是深入進行分子生物學研究的基礎。基于PCR分子標記技術已經廣泛應用于基因定位、基因克隆、轉基因植株檢測及分子標記輔助育種等方面，這些研究都需要進行大量DNA提取工作。然而，DNA提取是一項耗費人力、物力的繁瑣工作。因此，建立適合PCR分析的簡便、高效、低成本且較為相安全的DNA提取方法是非常必要的。

前人已就植物基因組DNA的提取總結了一系列的方法，如SDS法和CTAB法，雖然這些方法抽提的DNA質量較好，但過程費力且繁瑣，需要使用氯仿、異戊醇等有毒化學試劑，難以適用于大量植物葉片基因組DNA提取的需要。相應地，一些生物公司也開了一些基因組DNA提取試劑盒，但試劑盒提取DNA成本較高，也不適用于大量樣品DNA的提取。

發明內容

為了解決上述問題，實現高通量提取水稻DNA，滿足各種PCR分子標記技術的要求，本發明提供了一種簡單、快速的提取植物DNA的方法。

本發明具體通過以下技術方案實現：

一種水稻DNA的簡易提取方法，包括以下步驟：

1)從水稻幼苗上剪取葉片并剪成碎片，放入離心管中；

2)加入小鋼珠和DNA提取液，在Tissuelyser-192組織研磨儀上震蕩研磨；

3)加入氯仿顛倒混勻，靜置后，離心至清晰分相，吸取上清液轉入新的離心管中，棄槍頭；

4)加入在-20℃冰箱預冷的無水乙醇，顛倒混勻；

5)離心至沉淀附于離心管底部，棄上清液，用乙醇洗滌沉淀，將離心管倒置，自然干燥；

6)加入1/10×TE緩沖液溶解沉淀，樣品置于-20℃冰箱中保存備用。

進一步，所述的震蕩研磨具體為：在25Hz下震蕩研磨60s。

進一步，所述的步驟(4)中冰箱的溫度條件為-20℃。

進一步，所述的離心條件均為11000rpm。

進一步，所述的洗滌沉淀用的乙醇濃度為70％。

進一步，所述的DNA提取液為：10mL濃度為1M的Tris-HCl(pH8.0)、10mL濃度為0.5M的EDTA(pH8.0)、10mL濃度為5M的NaCl，最后利用dd H₂O定容至100mL，配置新鮮溶液待用。

本發明的有益效果為：

本發明提供了一種操作簡單的水稻DNA提取方法，該方法在提取過程中使用的試劑相比現有技術少，不僅降低了成本，還減少SDS和異戊醇等有毒有害試劑使用，提高實驗人員的安全性，且提取得到的DNA具有很長的保存時間，不易降解，同時提高了水稻DNA的提取效率。

附圖說明

圖1是SSR標記RM303檢測協青早B(XB)和196個協青早B與東鄉野生稻BC₂F₅株系基因型結果；