[發(fā)明專(zhuān)利]一種紐莫康定B0絲氨酸類(lèi)似物的分離純化方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810689082.3
• 申請(qǐng)日: 2018-06-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110655557A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-01-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張磊
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 浙江醫(yī)藥股份有限公司新昌制藥廠
• 主分類(lèi)號(hào): C07K7/56
• 分類(lèi)號(hào): C07K7/56;C07K1/20;C07K1/16
• 代理公司: 11042 北京乾誠(chéng)五洲知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 付曉青;李廣文

1.一種紐莫康定B0絲氨酸類(lèi)似物的分離純化方法，所述分離純化方法包括以下步驟：

a)將含有絲氨酸類(lèi)似物的紐莫康定B0粗品采用色譜填料進(jìn)行第一次層析富集，其中，所述色譜填料為聚苯乙烯/二乙烯基苯UniPS、聚苯乙烯/二乙烯基苯UniPSA或聚丙烯酸UniPSN，流動(dòng)相為甲醇水溶液、乙醇水溶液、乙腈水溶液或丙酮水溶液；層析后進(jìn)行等度洗脫或梯度洗脫、分段收集，以得到含有純度＞30％的紐莫康定B0絲氨酸類(lèi)似物的第一次層析富集液；

b)將所述第一次層析富集液進(jìn)行減壓濃縮以除去溶劑，再用親水作用色譜填料進(jìn)行第二次層析純化，所述親水作用色譜填料為Xamide、X3或HILIC，流動(dòng)相為甲醇水溶液、乙醇水溶液、乙腈水溶液或丙酮水溶液；層析后進(jìn)行等度洗脫或梯度洗脫、分段收集，以得到含有純度＞60％的紐莫康定B0絲氨酸類(lèi)似物的第二次層析富集液；

c)將所述第二次層析富集液進(jìn)行減壓濃縮以除去溶劑，再用反相硅膠基質(zhì)色譜填料第三次層析純化，所述反相硅膠基質(zhì)色譜填料為C8或C18，流動(dòng)相為甲醇水溶液、乙醇水溶液、乙腈水溶液或丙酮水溶液；層析后進(jìn)行等度洗脫或梯度洗脫、分段收集，以得到含有純度＞80％的紐莫康定B0絲氨酸類(lèi)似物的第三次層析富集液；

d)將所述第三次層析富集液進(jìn)行減壓濃縮以除去溶劑，再凍干，以得到純度＞80％的紐莫康定B0絲氨酸類(lèi)似物干粉。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離純化方法，其特征在于，在步驟a)中，所述色譜填料的粒徑為5μm、10μm或30μm，所述色譜填料的孔徑為100A、300A或500A。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離純化方法，其特征在于，在步驟a)中，所述甲醇水溶液中甲醇的比例為65-85％(體積比)；所述乙醇水溶液中乙醇的比例為70-90％(體積比)；所述乙腈水溶液中乙腈的比例為30-50％(體積比)；所述丙酮水溶液中丙酮的比例為60-80％(體積比)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離純化方法，在步驟b)中，所述色譜填料的粒徑為5μm、10μm或30μm；所述色譜填料的孔徑為60A、100A或120A。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離純化方法，其特征在于，在步驟b)中，所述甲醇水溶液中甲醇的比例為60-80％(體積比)；所述乙醇水溶液中乙醇的比例為65-85％(體積比)；所述乙腈水溶液中乙腈的比例為35-55％(體積比)；所述丙酮水溶液中丙酮的比例為70-90％(體積比)。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離純化方法，其特征在于，在步驟c)中，所述色譜填料的粒徑為5μm、10μm或30μm；所述色譜填料的孔徑為60A、100A或120A。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離純化方法，其特征在于，在步驟c)中，所述甲醇水溶液中甲醇的比例為65-85％(體積比)；所述乙醇水溶液中乙醇的比例為70-90％(體積比)；所述乙腈水溶液中乙腈的比例為40-60％(體積比)；所述丙酮水溶液中丙酮的比例為65-85％(體積比)。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離純化方法，其特征在于，在步驟d)中，減壓濃縮時(shí)，溫度控制在10-50℃，優(yōu)選20-40℃，更優(yōu)選25-35℃。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離純化方法，其特征在于，在步驟d)中，減壓濃縮時(shí)，壓力控制在-0.09mPa～-0.1mPa。