[發明專利]用于青楊雌性幼苗快速鑒定的特異性分子標記PCMI-F001

有效

• 申請號: 201810687122.0
• 申請日: 2018-06-28
• 公開（公告）號: CN108754015B
• 公開（公告）日: 2021-04-06
• 發明（設計）人: 亢介玉;盧江杰;何金宇;李春陽
• 申請（專利權）人: 杭州師范大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 杭州君度專利代理事務所(特殊普通合伙) 33240
• 代理人: 黃前澤

1.用于青楊雌性幼苗快速鑒定的特異性分子標記PCMI-F001，其特征在于擴增該分子標記的擴增引物序列如下：

上游引物PCMI-F001-F：5’- TCCAGCCTAGGTAAGCCTCTT -3’，如SEQ ID No：1所示；

下游引物PCMI-F001-R：5’- AGCCCCTTAACCTTTGGATTT -3’，如SEQ ID No：2所示。

2.權利要求1所述的用于青楊雌性幼苗快速鑒定的特異性分子標記PCMI-F001在青楊幼苗雌雄分子鑒定中的應用。

3.一種利用如權利要求1所述的特異性分子標記進行青楊幼苗雌雄分子鑒定的方法，其特征在于該方法首先提取待測青楊雌雄單株樣本的基因組DNA為模板，利用如權利要求1所述的特異性分子標記PCMI-F001進行PCR擴增得到擴增產物；對得到的擴增產物進行電泳檢測，若電泳結果出現一條801 bp的DNA條帶，則待測樣本為雌性青楊幼苗個體；若電泳結果未出現一條801 bp的DNA條帶，則待測樣本為雄性青楊幼苗個體。

4.如權利要求3所述的鑒別方法，其特征在于PCR擴增體系：含Mg²⁺ 10×PCR Buffer 1μL，10mmol/L dNTPs 0.3 μL，10 μmol/L上游引物0.5 μL，10 μmol/L下游引物0.5 μL，5 U/μL Taq酶0.2 μL，50ng/μL DNA模板1μL，ddH₂O 6.5 μL，共10 μL。

5.如權利要求3所述的鑒別方法，其特征在于PCR反應程序為：94℃預變性5分鐘；32個循環，每個循環包括94℃變性30秒，退火溫度59℃復性40秒，72℃延伸90秒；最后72℃延伸10分鐘。