[發明專利]田鼠巴貝蟲2D41抗原蛋白及其應用

有效

• 申請號: 201810686127.1
• 申請日: 2018-06-28
• 公開（公告）號: CN108893477B
• 公開（公告）日: 2022-07-05
• 發明（設計）人: 胡薇;徐斌;劉秀鳳;周霞;陳家旭;陳軍虎;張颋;莫筱瑾;鄧王平;黨志勝;蔡玉春
• 申請（專利權）人: 中國疾病預防控制中心寄生蟲病預防控制所（國家熱帶病研究中心）;復旦大學
• 主分類號: C12N15/30
• 分類號: C12N15/30;C07K14/44;C07K16/20;C12Q1/6893;G01N33/68;A61K39/018;A61P33/02
• 代理公司: 上海浦一知識產權代理有限公司 31211
• 代理人: 鄭權

本發明公開一種田鼠巴貝蟲2D41抗原蛋白及其應用，其氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示，其編碼基因序列如SEQ ID NO：7所示。該田鼠巴貝蟲2D41抗原蛋白在特異性IgG抗體反應中與14dpi～270dpi的鼠血清有持續高免疫反應，在免疫保護性試驗中表現出明顯降低蟲血癥的效果，相比佐劑組和自然免疫組蟲血癥均值下降35％左右。該2D41抗原蛋白既可用于檢測或診斷田鼠巴貝蟲病，還可用于制備降低蟲血癥的治療和/或預防的藥物。

技術領域

本發明涉及分子、細胞、蛋白質組學和免疫學研究領域，具體涉及田鼠巴貝蟲免疫蛋白的制備和免疫反應譜的獲得，以及在候選診斷抗原和免疫保護疫苗篩選中的應用。

背景技術

巴貝蟲病是由巴貝蟲屬原蟲寄生在紅細胞內所致的人畜共患的寄生蟲病，通過蜱叮咬和輸血進行傳播。從野生動物和家畜分離的巴貝蟲有一百多種，其中有感染人的病例報道的主要包括：B.microti和相關病原，B.divergens和相關病原,B.duncani和相關病原,B.venatorum。在2011年1月，巴貝蟲病被列入國家法定傳染病。在美國，大多數巴貝蟲病例都是田鼠巴貝蟲引起的，有報道在1979年到2009年間，162例輸血相關的巴貝蟲病例中有159份的病原體被鑒定是田鼠巴貝蟲，田鼠巴貝蟲是人類巴貝蟲病的一個主要病原體。人感染巴貝蟲后的表現差異較大，在健康人中，大多呈現隱性感染；而在免疫缺陷病人中，如脾切除，HIV患者，老人和孩子等則會病情嚴重甚至死亡。

目前，巴貝蟲病的診斷方法包括：鏡檢血片，抗體檢測和PCR檢測及轉接試驗動物，但是，各檢測方法有相對的局限性。吉氏染色外周血涂片的油鏡檢查是巴貝蟲病診斷的金標準，但通常情況下外周紅細胞感染百分比較低，而且形態與瘧原蟲屬相似；PCR技術具有很高的敏感性和特異性，但不適用于低密度蟲血癥和窗口期樣本的檢測；抗體的檢測具有很高的敏感性，也適用于低密度的感染樣本的檢測，但是它同樣不能對窗口期的樣本進行有效檢測，而且在蟲血癥清除之后，抗體仍然會持續相當一段時間而呈現假陽性。由于田鼠巴貝蟲病的自限性和當前檢測手段的局限性，在疾病篩查中非常容易被誤診或漏診，以至造成血制品的污染而形成疾病輸血性傳播。現有診斷抗原的缺陷在于，無法檢測感染早期(窗口期)的樣本，也無法反應感染從急性期轉入慢性期的疾病進程，比如目前文獻報道中具有診斷效果的抗原BmSA1、BmP94、BmIRA、BMN1-8、BM1542、Bm186等。

研究表明，抗體水平的檢測對于隱性感染病例的篩查具有重要意義，在急性感染階段，IgM抗體最先產生并對寄生蟲做出響應，而特定的IgG則與寄生蟲數量的減少有關。然而，在巴貝蟲病的感染進程中，感染早期(窗口期)的樣本不能有效檢測，感染從急性期轉入慢性期的過程中，抗原譜/免疫反應譜目前尚不清楚，疾病進程得不到監測。通過免疫反應譜了解巴貝蟲病的疾病進程，篩選能夠反應疾病進程的標志性抗原，對發展一種通量高，快速、敏感的田鼠巴貝蟲診斷試劑以滿足疾病檢測和篩查的需求非常重要。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于，針對目前田鼠巴貝蟲病檢測的局限性，提供一種或多種田鼠巴貝蟲的標志性抗原，表現為疾病全程均維持高水平應答，并且具有控制組蟲血癥的效果，既能夠用于檢測或診斷田鼠巴貝蟲感染，還能夠作為候選疫苗，用于制備降低蟲血癥的治療和/或預防的藥物。

本發明提供了一種分離的基因，可編碼田鼠巴貝蟲2D41抗原蛋白，其序列如SEQID NO：7所示。

本發明提供一種田鼠巴貝蟲2D41抗原蛋白，由上述的分離的基因編碼，其氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示。

本發明提供了另一種分離的基因在制備治療、診斷或者預防田鼠巴貝蟲病的產品中的應用，上述的一種分離的基因可編碼田鼠巴貝蟲2D41抗原蛋白，其序列如SEQ ID NO：7所示。所述的產品包括用于治療、預防的藥物，用于檢測、診斷的試劑條、試劑盒等。