[發(fā)明專利]一株高產(chǎn)靈菌紅素海洋細(xì)菌分離鑒定與應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810685803.3
• 申請日: 2018-06-28
• 公開（公告）號: CN108707572B
• 公開（公告）日: 2022-02-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 高程海;米順利;丁永奎;蘇志維;杜瑜欣;易湘茜
• 申請（專利權(quán)）人: 廣西中醫(yī)藥大學(xué)
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C12P17/16;C12R1/01
• 代理公司: 北京天奇智新知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11340
• 代理人: 韋玲雙

本發(fā)明涉及微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一株海洋細(xì)菌分離鑒定及其應(yīng)用。該海洋細(xì)菌命名為Notoacmeibacter marinus IMDGXO 109，保藏號為CCTCC NO：M 2018148；保藏地點為：中國，武漢，武漢大學(xué)，中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏時間為2018年03月22日。通過本申請的操作步驟能提高該菌種目的產(chǎn)物靈菌紅素的產(chǎn)率和穩(wěn)定性，所產(chǎn)的代謝產(chǎn)物純度高、安全性好，可以應(yīng)用于醫(yī)藥行業(yè)。

【技術(shù)領(lǐng)域】

本發(fā)明涉及微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一株高產(chǎn)靈菌紅素海洋細(xì)菌分離鑒定與應(yīng)用。

【背景技術(shù)】

微生物所產(chǎn)次級代謝產(chǎn)物不是其在生長和繁殖所必須的物質(zhì)(色素、抗生素、毒素、和激素等)，但對人類活動有著非常重要的研究價值和意義。靈菌紅素廣泛存在于自然界中，具有抗菌、抗腫瘤、抗瘧疾和免疫抑制等多種生物活性，因此，在醫(yī)藥藥品行業(yè)等具有很好的應(yīng)用價值和市場前景。

目前，國內(nèi)外有關(guān)海洋細(xì)菌產(chǎn)靈菌紅素的微生物，新型菌株的篩選報道較少。國內(nèi)外對靈菌紅素的研究主要集中在沙雷氏菌發(fā)酵工藝的優(yōu)化及其在免疫學(xué)功能等方面有著比較豐富的研究。但沙雷氏菌并非優(yōu)秀的生產(chǎn)菌種，且是一種條件致病菌，靈菌紅素其產(chǎn)量比較低且受到分離純化技術(shù)的影響，難以實現(xiàn)工業(yè)大規(guī)模的發(fā)酵和生產(chǎn)。因此，從自然界篩選生產(chǎn)單一結(jié)構(gòu)靈菌紅素的新型菌株，并鑒定其在系統(tǒng)分類學(xué)上的歸屬且菌株能高產(chǎn)靈菌紅素的研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

鑒于上述內(nèi)容，一株高產(chǎn)靈菌紅素海洋細(xì)菌分離鑒定與應(yīng)用。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

一株高產(chǎn)靈菌紅素海洋細(xì)菌，所述該海洋細(xì)菌命名為NotoacmeibactermarinusIMDGXO 109，保藏號為CCTCC NO：M 2018148；保藏地點為：中國，武漢，武漢大學(xué)，中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏時間為2018年03月22日。

進(jìn)一步說明，所述該菌株在LA培養(yǎng)基或NA培養(yǎng)基上生長良好，菌落呈紅色，株菌屬于革蘭氏陽性菌，大小為0.3～0.7×0.8～3.1μm，表面光滑，游動型短桿菌，無氣絲，有鞭毛。

如上的高產(chǎn)靈菌紅素海洋細(xì)菌的分離鑒定方法，由以下具體步驟得到：梯度稀釋篩選、純培養(yǎng)純化、16S rDNA鑒定。

如上的一種高產(chǎn)靈菌紅素海洋細(xì)菌的發(fā)酵產(chǎn)物，所述發(fā)酵產(chǎn)物為靈菌紅素，具體通過以下方法制備得到：

(1)將從海洋生物中分離得到的細(xì)菌進(jìn)行活化，待菌體生長到對數(shù)期時，于培養(yǎng)基中，于27～29℃、170～190r/min下振蕩，發(fā)酵培養(yǎng)20～28h，得到發(fā)酵培養(yǎng)液；

(2)將發(fā)酵液離心后所得紅色菌體，IMDGX0109菌株所產(chǎn)色素為胞內(nèi)色素，采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20％-30％的有機試劑丙酮浸泡過夜；

(3)將步驟(2)所得紅色菌體用磁力攪拌器在室溫下避光攪拌30min，離心至菌體無色，收集丙酮萃取液，接著使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮得到色素粗提物；

(4)將所得色素粗提物用按照體積比為1:3的三氯甲烷和去離子水混合萃取并濃縮得到純化后的色素提取物，整個過程在避光狀態(tài)下進(jìn)行處理。

進(jìn)一步說明，所述純化后的色素提取物的產(chǎn)量達(dá)到0.632g/L以上，純度達(dá)到98％以上。

進(jìn)一步說明，所述改良Isp2培養(yǎng)基的配制方法為：首先稱取葡萄糖2g/L、酵母提取物2g/L、麥芽提取粉2g/L溶于蒸餾水中，并在121℃下高壓滅菌20min。

與現(xiàn)有技術(shù)相比較，本發(fā)明具有如下有益效果：

1、本發(fā)明提供的一株具備高產(chǎn)靈菌紅素類化合物的海洋細(xì)菌IMDGX0109，該菌株是從海洋生物共附生微生物中分離篩選得到的，工藝簡單，菌種對環(huán)境友好；