[發明專利]一種檢測過氧亞硝基陰離子的熒光探針、合成方法和應用

有效

• 申請號: 201810684964.0
• 申請日: 2018-06-28
• 公開（公告）號: CN108752377B
• 公開（公告）日: 2020-07-03
• 發明（設計）人: 申有名;唐裕才;張春香;張向陽;丁祥;周詩彪;靳俊玲;黃小兵
• 申請（專利權）人: 湖南文理學院
• 主分類號: C07F9/32
• 分類號: C07F9/32;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 北京風雅頌專利代理有限公司 11403
• 代理人: 曾志鵬

本發明公開了一種檢測過氧亞硝基陰離子的熒光探針、合成方法和應用，所述熒光探針的結構式為：所述熒光探針的Stoke位移為120nm，吸收波長的范圍為450?476nm，應用于對過氧亞硝基陰離子進行定量檢測，其合成方法包括將2?羥基苯甲醛和三乙胺溶于四氫呋喃中，加入二苯基次膦酰氯與之反應；反應完成后，處理得到中間產物；將中間產物與水合肼溶于有機溶劑中，處理得到熒光探針。本發明的熒光探針選擇性高，在檢測ONOO^?時能產生較大的Stoke位移，能提高檢測ONOO^?的精準度。

技術領域

本發明涉及應用生物領域，具體涉及到一種檢測過氧亞硝基陰離子的熒光探針、合成方法和應用。

背景技術

過氧亞硝基陰離子(ONOO^-)被認為是最重要的陰離子之一，在人體內由過量的一氧化氮(NO)和氧自由基(.O^2-)反應產生，它既是強氧化劑，又是硝化劑，可與人體細胞內的核酸、蛋白質、脂質等大分子物質反應，使細胞的代謝發生困難并且使機體消耗大量的能量，從而引起一系列的生物病變過程，如腫瘤、動脈硬化、身體炎癥、視網膜損傷等。近年來，醫學界也不乏大量對于ONOO^-的檢測的研究，但是由于ONOO^-的強氧化性，在體內很不穩定，這為ONOO^-的檢測帶來不便。因此，建立一種快速、靈敏、高選擇性的檢測方法用于研究過氧亞硝基陰離子引起的生物體病變具有十分重要的醫學意義。目前，檢測ONOO^-的方法主要有電子自旋法，紫外光譜法，電分析法以及化學發光法，但是這些方法大部分比較復雜，耗時、耗力、干擾因素多，有的還需要貴重儀器和較大的樣品體積，一般不適用于生物體內快速、實時、原位定量對ONOO^-進行檢測和分析。因此，研究一種新的方法檢測生物體內ONOO^-具有重要的意義。

熒光探針法具有高選擇性和靈敏度，非破壞性的分析和檢測系統易操作性等優點，在環境、化學、生物和醫學等領域存在著廣泛的應用。其中，以有機熒光染料為基礎的生物分子標記和分子熒光探針具有操作簡便、重現性好等優點，可方便用于生物分子的原位、實時無損傷檢測以及生物分子及其生物過程的追蹤。然而，大多數熒光染料(如熒光素，羅丹明，惡嗪和花菁素)選擇性不高，并不能區分開ONOO^-同其他活性氧化物，且產生的Stokes位移都非常小(一般30nm)，導致激發光譜和發射光譜之間的嚴重串擾，造成成像時信噪比低和嚴重的熒光自淬滅現象，限制了其在生物成像中的應用。

目前，已報道的檢測ONOO^-的熒光機制主要為機硒化合物的氧化、4-羥甲基苯胺化合物氧化、肼類化合物的氧化等。然而，對生物體內ONOO^-檢測，這些熒光物質不僅Stoke位移較小，還容易與其他氧化物如·OH、OCl^-發生反應；特別是較小的Stoke位移，比較容易受到生物體自身的干擾，不利于ONOO^-的精準檢測。

文獻CN107488189A公開了二酚化合物與2-醛基苯硼酸形成的自組裝及其作為熒光探針的應用，用于對自由基次氯酸和過氧亞硝基的定量檢測，但該方法并沒有涉及和解決熒光探針stoke位移較小和選擇性不高的問題。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種檢測過氧亞硝基陰離子的熒光探針、合成方法和應用，該熒光探針選擇性高，在檢測ONOO^-時能產生較大的Stoke位移，能提高檢測ONOO^-的精準度。

本發明的內容包括熒光探針的結構如式Ⅰ所示：

其中，R基團能替換為-OH、-Cl和-OCH₃，熒光探針的Stoke能位移達到120nm。

所述熒光探針吸收波長的范圍為450-476nm。