[發明專利]一種煙曲霉batA基因及其應用

在審

• 申請號: 201810684310.8
• 申請日: 2018-06-28
• 公開（公告）號: CN108753800A
• 公開（公告）日: 2018-11-06
• 發明（設計）人: 仲國維;袁安杰;侯斯愷;陳明聰
• 申請（專利權）人: 南京醫科大學
• 主分類號: C12N15/31
• 分類號: C12N15/31;C07K14/38;C12N1/15;C12R1/68
• 代理公司: 南京業騰知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32321
• 代理人: 鄭婷

本發明涉及一種煙曲霉batA基因，屬于基因工程技術領域。所述煙曲霉batA基因的核苷酸序列如SEQ ID No:1所示，其編碼的蛋白質序列如SEQ ID No:2所示。本發明公開的煙曲霉batA基因可作為治療靶基因在制備或篩選曲霉病治療藥物中得到應用。batA缺失導致煙曲霉對醋酸卡泊芬凈耐藥，batA高表達導致煙曲霉對于醋酸卡泊芬凈敏感，臨床治療中如果將batA基因表達量或活性上調后再用醋酸卡泊芬凈治療具有更高效殺菌的效果，同時避免能使batA基因表達量下調或缺失的處理以免產生耐藥的風險，這為有效治療臨床深部煙曲霉感染以及控制耐藥菌株，具有重要的臨床應用價值。

技術領域

本發明涉及一種煙曲霉batA基因，以及缺失batA基因的煙曲霉變種對抗真菌藥醋酸卡泊芬凈耐藥和高表達batA基因的煙曲霉變種對醋酸卡泊芬凈敏感的用途，屬于基因工程技術領域。

背景技術

在醫學界，隨著高效廣譜抗生素的廣泛應用、抗腫瘤治療的深入開展，器官移植和外科其他介入性治療的不斷應用，侵襲性真菌感染的發生呈現上升趨勢。在免疫體系受抑制或免疫缺陷的病人群體中，患有侵染性曲霉病的人群目前大約有2-10％，其中，全球有約300-400萬人分別患有慢性肺曲霉病和過敏性肺支氣管曲霉病。由于真菌的多樣性、不同真菌侵染途徑的相對獨立性、已有抗真菌藥物的抑真菌效果并不盡如人意。尤為突出的是病原真菌可以通過藥物外排泵的功能性高表達表現為多藥耐藥性。患有免疫缺陷的病人一旦被唑類藥多藥抗性的曲霉菌感染，致死率達到88％。目前治療深度曲霉感染的臨床一線藥物主要是伊曲康唑(ITZ)和伏立康唑(VRC)。然而，已經發現越來越多的臨床分離菌對唑類藥物產生耐藥性。目前，新型抗真菌藥物棘白菌素類(echinocandins)中的卡泊芬凈Caspofungin acetate(CAS)正在被推薦為侵襲性曲霉感染的挽救療法。但是，隨著卡泊芬凈的應用，臨床上已經出現少量耐藥念珠菌和煙曲霉菌株。因此，煙曲霉對于唑類藥物的抗藥性是人類健康越來越嚴重的一大威脅。尤其是頻繁的城市改建和人口的大量流動都加劇了世界公共衛生面臨的這一問題的嚴重性。

胞外囊泡(extracellular vesicles，EVs)是細胞遭受刺激時產生并釋放的超微囊性結構，是細胞旁分泌的生物活性物質之一，包括微泡(MVs)和外泌體(exosomes)，在細胞內和細胞間信息傳遞中起著重要作用，包括細胞和細胞間耐藥性的產生。本發明人針對對煙曲霉囊泡上的一個重要的新型ABC(ATP-binding cassette)轉運蛋白batA在煙曲霉對醋酸卡泊芬凈敏感性和耐受性方面的調節作用進行了研究，為有效地尋找新的藥物靶點以及治療真菌疾病方面具有非常重要的意義。

發明內容

本發明的目的在于提供了一種煙曲霉batA基因，以及該基因缺失和高表達在煙曲霉對抗真菌藥醋酸卡泊芬凈的影響，并分別構建了煙曲霉醋酸卡泊芬凈耐藥株和敏感株。

技術方案

一種煙曲霉batA基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

上述基因編碼的蛋白序列如SEQ ID NO:2所示。

上述煙曲霉batA基因作為治療靶基因在制備或篩選曲霉病治療藥物中的應用。

本發明的煙曲霉batA基因，可用于構建煙曲霉batA基因缺失菌株和batA基因高表達菌株，所述batA基因缺失菌株為煙曲霉醋酸卡泊芬凈耐藥株，batA基因高表達菌株為煙曲霉醋酸卡泊芬凈敏感株，本發明的煙曲霉醋酸卡泊芬凈敏感株屬于具有ABC結構域超家族的多藥轉運相關基因高表達株。在所述煙曲霉batA基因缺失株中batA基因不表達，在所述煙曲霉batA基因高表達株中batA基因高表達9.2倍。與野生型煙曲霉相比，所述缺失株和高表達株菌落生長速率無明顯變化。