[發(fā)明專(zhuān)利]一種白酒丟糟的高效水解菌株的篩選方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810683417.0
• 申請(qǐng)日: 2018-06-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108913604A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-11-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 康穎倩;羅鵬
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 貴州醫(yī)科大學(xué);貴州樂(lè)康能源科技發(fā)展有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/02
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/02;C12Q1/04
• 代理公司: 貴陽(yáng)中新專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所 52100
• 代理人: 商小川

本發(fā)明公開(kāi)一種白酒丟糟的高效水解菌株的篩選方法，其特征在于：包含以下步驟：第一、菌種庫(kù)中相關(guān)水解白酒丟糟可能水解白酒丟糟的有效真菌、從白酒丟糟堆放環(huán)境中直接分離培養(yǎng)真菌；第二、將篩選出來(lái)的真菌以白酒丟糟中難以水解的單一聚合物為唯一碳源，依次通過(guò)羧甲基纖維素鈉—?jiǎng)偣t培養(yǎng)基、PDA—苯胺藍(lán)培養(yǎng)基、木聚糖—?jiǎng)偣t培養(yǎng)基進(jìn)行初步篩選；第三、將菌株在以白酒丟糟為唯一營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的丟糟液中培養(yǎng)，判斷菌株對(duì)丟糟水解能力；第四、將復(fù)合菌組在白酒丟糟液中進(jìn)行酶活力測(cè)試，篩選具有協(xié)同作用、酶活力高的菌組即為高效復(fù)合水解菌組；第五、將高效復(fù)合菌組與公開(kāi)發(fā)表過(guò)的具有高效水解纖維素的突變菌株的酶活力以及水解生物質(zhì)的能力進(jìn)行比較。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及水解白酒丟糟方案的優(yōu)化研究，特別涉及二組新的高效水解白酒丟糟的復(fù)合菌組的篩選研究。

技術(shù)背景

白酒丟糟是谷物等經(jīng)過(guò)反復(fù)發(fā)酵及蒸餾提取酒精后營(yíng)養(yǎng)貧瘠的谷物外殼及殘留渣體。即丟糟水分、木質(zhì)纖維素(纖維素、半纖維、木質(zhì)素)含量高，粗蛋白、粗脂肪等含量低,因?yàn)閬G糟營(yíng)養(yǎng)成分少，木質(zhì)纖維素難水解，所以不能像一般酒糟那樣有效的利用,從而使丟糟的轉(zhuǎn)化受到極大的限制。況且丟糟酸度大，水分含量較高，極易腐敗變質(zhì)造成廠區(qū)及周?chē)h(huán)境污染。而大大小小的酒廠分布在中國(guó)各地，這些酒廠給當(dāng)?shù)鼐用駧?lái)收入的同時(shí)，也產(chǎn)生了大量的丟糟，年排放量超過(guò)了20萬(wàn)噸。如何處理這些丟糟也是當(dāng)?shù)卣熬茝S管理人員頭痛的事。

近年來(lái)，利用微生物處理生物廢料成為熱點(diǎn)，因?yàn)榕c物理及化學(xué)處理方式所需要昂貴的設(shè)備及試劑相比，生物預(yù)處理是在溫和的條件下通過(guò)利用微生物固體發(fā)酵水解木質(zhì)纖維素類(lèi)生物，設(shè)備要求無(wú)特殊，并且非病原性水解木質(zhì)纖維素的微生物在環(huán)境中廣泛存在，具有廉價(jià)、易獲得、環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題：針對(duì)丟糟酸度大、營(yíng)養(yǎng)低、可利用價(jià)值低、污染環(huán)境的情況，提供一種以微生物高效復(fù)合菌組來(lái)提高丟糟水解速率，減小廢渣存放空間，降低廢渣處理成本的技術(shù)方案，促進(jìn)維持良好生態(tài)環(huán)境,達(dá)到可持續(xù)循環(huán)利用白酒丟糟，為零排放無(wú)污染的政府倡導(dǎo)企業(yè)目標(biāo)打下基礎(chǔ)。

本發(fā)明的技術(shù)方案：一種白酒丟糟的高效水解菌株的篩選方法，包含以下步驟：第一、從荷蘭Westerdijk Fungal Biodiversity institute菌種庫(kù)中相關(guān)水解白酒丟糟所需要的關(guān)鍵酶信息來(lái)篩選可能水解白酒丟糟的有效真菌、從白酒丟糟堆放環(huán)境中直接分離培養(yǎng)出可在極酸及營(yíng)養(yǎng)成分貧乏條件下生長(zhǎng)的真菌；第二、將篩選出來(lái)的真菌以白酒丟糟中難以水解的單一聚合物為唯一碳源，依次通過(guò)羧甲基纖維素鈉—?jiǎng)偣t培養(yǎng)基、PDA—苯胺藍(lán)培養(yǎng)基、木聚糖—?jiǎng)偣t培養(yǎng)基進(jìn)行初步篩選；第三、將第二步中直徑與水解、顯色圈比值較大的菌株，在以白酒丟糟為唯一營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的丟糟液中培養(yǎng)，測(cè)試酶活力，判斷菌株對(duì)丟糟水解能力大小，作為進(jìn)一步篩選；第四、通過(guò)將酶活值高的菌株組成復(fù)合菌組，將復(fù)合菌組在白酒丟糟液中進(jìn)行酶活力測(cè)試，篩選具有協(xié)同作用、酶活力高的菌組即為高效復(fù)合水解菌組，并利用產(chǎn)酶優(yōu)化培養(yǎng)基優(yōu)化高效復(fù)合菌組產(chǎn)酶能力；第五、將高效復(fù)合菌組與公開(kāi)發(fā)表過(guò)的具有高效水解纖維素的突變菌株的酶活力以及水解生物質(zhì)的能力進(jìn)行比較。

所述的高效水解菌株為CBS 113.65 Oidiodendron echinulatum、CBS246.84Phanerochaete chrysosporium、CBS 383.78 Trichoderma reesei、CBS554.65Aspergillus niger、CBS 110.42 Aspergillus niger和GYM-37 Bjerkanderaadusta中的一種或一種以上組合。

優(yōu)選的，高效水解菌株為CBS 383.78+CBS 554.65和CBS 383.78+CBS554.65+GYM-37兩個(gè)復(fù)合菌組。

所述的白酒丟糟堆放環(huán)境中直接分離培養(yǎng)包含：