[發明專利]一種從云南蓍中分離純化墻草堿的方法

在審

• 申請號: 201810680683.8
• 申請日: 2018-06-27
• 公開（公告）號: CN108484430A
• 公開（公告）日: 2018-09-04
• 發明（設計）人: 孫艷濤;趙磊;李曉甜;王路宏;高秀紅;張進;李文君
• 申請（專利權）人: 吉林師范大學
• 主分類號: C07C233/09
• 分類號: C07C233/09;C07C231/24
• 代理公司: 吉林省長春市新時代專利商標代理有限公司 22204
• 代理人: 唐盼

本發明涉及一種從云南蓍中分離純化墻草堿的方法，包括以下步驟：步驟S1、云南蓍藥材粉碎成粗粉，加入95％乙醇，回流提取3次，每次2h；步驟S2、將步驟S1提取的粗提浸膏與硅膠拌樣，上硅膠柱，進行硅膠柱層析，采用石油醚?乙酸乙酯[1：0→5：1→3：1]梯度洗脫，收集洗脫液，每個梯度合并成1個部分；步驟S3、將石油醚?乙酸乙酯[5：1]部分的洗脫液回收溶劑至干，得到富含墻草堿的粗品；步驟S4、將步驟S3墻草堿的粗品用適量石油醚?乙酸乙酯(1:1)溶解后，靜置24h；步驟S5、將步驟S4析出的晶體用乙酸乙酯溶解、靜置、重結晶后得到墻草堿的純品。該方法操作簡單，提取收率高，提取制備成本低，具有較高的社會效益和經濟效益。

技術領域

本發明屬于藥用植物活性成分的提取技術領域，具體涉及一種從云南蓍中分離純化墻草堿的方法。

背景技術

云南蓍Achillea wilsoniana Heimerl ex Hand.-Mazz為菊科蓍屬植物，收載于《貴州省中藥材、民族藥材質量標準》2003年版中，在貴州做蓍草使用，是苗藥復方透骨香乳膏的組方藥材。云南蓍地理分布較廣，產量較大，產于云南、四川、貴州、湖南西北部、湖北西部、河南西北部、山西南部、陜西中南部、甘肅東部等均有廣泛分布，產量較大，生于山坡草地或灌叢中。全草或地上部分均可藥用，具有祛風止痛、活血解毒的功效，用于頭風痛、牙痛；風濕痹痛，血瘀經閉，腹部痞塊，跌撲損傷，蛇蟲咬傷，癰腫瘡毒。

墻草堿為神經酰胺類天然產物，具有抗炎、解熱、鎮痛、抗菌、血管保護等作用，在菊科蓍屬和胡椒科胡椒屬等數種植物中有分布，但大多數植物中含量不高，一般低于千分之一，且分離制備困難，提取率不高，分離制備需采用多次柱層析并結合制備液相色譜方可得到較純化合物。例如中國專利CN 104434889A公開了“以墻草堿作為有效成分含有的接觸性皮炎改善用組合物”，所用的墻草堿是從海風藤提取物中分離得到，具體分離純化方法為：將干燥的海風藤(10.2kg)粉碎后利用80％丙酮在室溫條件下萃取3次過濾后，將其萃取液減壓濃縮獲得提取物340g；再將其萃取液減壓濃縮后利用70％甲醇-己烷(MeOH-Hexane)，70％甲醇-氯仿(MeOH-Chloroform)進行溶劑分餾，共分餾為3層(己烷層，氯仿層，70％甲醇層)；其中，對己烷層采用硅膠(Silica gel)柱層析法，溶劑按照己烷-乙酸乙酯＝1:0～0:1提高濃度，實施TLC后分餾為17層，其中，對Fr.9層實施DaiSogel ODS-B和中壓液相色譜(MPLC)(60％MeOH→100％MeOH,梯度系統)柱層析法，再將其分餾為6層(Fr.9-1～9-6)，其中，對Fr.9-3層采用硅膠柱層析法，溶劑以己烷:CHCl 3:MeOH＝10:6:0.2使用，從而獲得墻草堿(100mg)，該提取方法收率不足十萬分之一，而且操作過程繁瑣。

發明內容

本發明的目的在于提供一種從云南蓍中分離純化墻草堿的方法，以解決現有的墻草堿分離提取操作過程繁瑣，提取收率低，無法規模化生產的技術難題。

本發明通過研究發現云南蓍中墻草堿的含量較高，并且云南蓍藥材分布廣，因此嘗試從云南蓍中提取分離墻草堿，本發明通過對有機溶劑合理的選擇和使用，最后成功的將墻草堿提取分離出來。

為實現上述目的，本發明具體是采用如下技術方案實現的：

一種從云南蓍中提取分離墻草堿的方法，具體包括以下步驟：

步驟S1、云南蓍藥材粉碎成粗粉，加入其重量8-10倍量的體積百分比為95％的乙醇，回流提取2-3次，每次2-3h，合并提取液，濃縮，得粗提浸膏；

步驟S2、將步驟S1得到的粗提浸膏與重量為粗體浸膏1.5-2倍的100～200目硅膠拌樣后，上粗提浸膏10倍量，200～300目硅膠柱，進行硅膠柱層析，采用石油醚-乙酸乙酯[1：0→5：1→3：1]梯度洗脫，收集洗脫液，每個梯度合并成1個部分；

步驟S3、將步驟S2得到的石油醚-乙酸乙酯[5：1]部分的洗脫液回收溶劑至干，得到富含墻草堿的粗品；