[發(fā)明專利]生物樣品中染料木素及其代謝產(chǎn)物的檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810678320.0
• 申請日: 2018-06-27
• 公開（公告）號: CN108982685A
• 公開（公告）日: 2018-12-11
• 發(fā)明（設計）人: 張連中;張加余;王志斌
• 申請（專利權）人: 北京鴻測科技發(fā)展有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京悅成知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 11527
• 代理人: 高艷麗

1.一種生物樣品中染料木素及其代謝產(chǎn)物的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)對生物樣品進行處理：將C18固相萃取柱用1～3倍柱體積的甲醇進行活化，再用1～3倍柱體積的去離子水進行平衡，然后取0.2～2倍柱體積的生物樣品加入所述固相萃取柱，依次以1～3倍柱體積的去離子水和0.5～2倍柱體積的甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液，吹干，殘渣用0.02～0.2倍柱體積的體積濃度為2vol％～7vol％的乙腈水溶液復溶，渦旋振蕩，離心，取上清液作為待測溶液；其中，所述生物樣品包括生物體吸收染料木素后的含有染料木素及其代謝產(chǎn)物的含藥血漿樣品和/或含藥尿液樣品；

(2)采用超高效液相色譜-質譜聯(lián)用儀檢測所述待測溶液，其中：

色譜條件為：色譜柱：C₁₈色譜柱；流動相：0.2vol％甲酸水溶液A與乙腈B；柱溫：25℃；梯度洗脫程序：0～3min，5vol％～18vol％B；2～12min，18vol％～55vol％B；流速：0.35mL/min；進樣量：5μL；

質譜條件為：電噴霧離子源負離子模式；鞘氣流速：30arb；輔助氣流速：10arb；毛細管電壓：-35V；噴霧電壓：3kV；管透鏡電壓：-110V；毛細管溫度：325℃；傅里葉高分辨掃描范圍m/z 50～500；分辨率40000；二級和三級質譜采用數(shù)據(jù)依賴性掃描，選擇上一級豐度最高的3個離子進行碰撞誘導解離碎片離子掃描；歸一化碰撞能量：35～45％。

2.根據(jù)權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟(1)中，所述的生物樣品還包括空白生物樣品，其是指生物體正常飲食下的空白血漿樣品和/或空白尿液樣品。

3.根據(jù)權利要求2所述的檢測方法，其特征在于，步驟(1)中，渦旋振蕩時間為2～10min，離心轉速為10000～18000r/min，離心時間為8～20min。

4.根據(jù)權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，步驟(1)中，所述生物樣品的處理方法為：將C18固相萃取柱用1～2倍柱體積的甲醇進行活化，再用1～2倍柱體積的去離子水進行平衡，然后取0.2～0.6倍柱體積的生物樣品加入所述固相萃取柱，依次以1～2倍柱體積的去離子水和0.6～1.5倍柱體積的甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液，常溫下氮氣吹干，殘渣用0.02～0.1倍柱體積的體積濃度為3vol％～5vol％的乙腈水溶液復溶，渦旋振蕩3～4min，12000～14000r/min下離心12～15min，取上清液作為待測溶液。

5.根據(jù)權利要求4所述的檢測方法，其特征在于，步驟(1)中，所述生物樣品的處理方法為：將C18固相萃取柱用1.67倍柱體積的甲醇進行活化，再用1.67倍柱體積的去離子水進行平衡，然后取0.33倍柱體積的生物樣品加入所述固相萃取柱，依次以1.67倍柱體積的去離子水和1倍柱體積的甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液，常溫下氮氣吹干，殘渣用0.03倍柱體積的體積濃度為5％的乙腈水溶液復溶，渦旋振蕩3min，13500r/min下離心15min，取上清液作為待測溶液。

6.根據(jù)權利要求5所述的檢測方法，其特征在于，步驟(1)中，所述C18固相萃取柱為Grace Pure^TM SPE C₁₈-Low固相萃取柱；所述色譜柱為ACQUITY UPLC HSS T3 C₁₈色譜柱。

7.根據(jù)權利要求2所述的檢測方法，其特征在于，步驟(2)中，所述歸一化碰撞能量：38～42％。

8.根據(jù)權利要求7所述的檢測方法，其特征在于，步驟(2)中，歸一化碰撞能量為39～40％。