[發明專利]一種辣椒疫霉菌培養基的制備方法及應用

在審

• 申請號: 201810675358.2
• 申請日: 2018-06-27
• 公開（公告）號: CN108795778A
• 公開（公告）日: 2018-11-13
• 發明（設計）人: 何烈干;馬輝剛;涂玉琴
• 申請（專利權）人: 江西省農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14
• 代理公司: 南昌新天下專利商標代理有限公司 36115
• 代理人: 施秀瑾

本發明一種辣椒疫霉菌培養基的制備方法及其應用，將紅薯洗凈去皮后，切成小塊后于水中煮沸10?60分鐘，然后用雙層紗布過濾，濾液中加入瓊脂，充分攪拌均勻，分裝后置于高壓蒸汽滅菌鍋中滅菌，取出倒入滅菌的培養皿中制成平板，待培養基充分冷卻凝固得到本發明的辣椒疫霉菌培養基。本發明通過以紅薯為原料制成培養基，可在短時間內獲得大量疫霉菌游動孢子囊，既解決了在常規固體培養基上極難或較少產生游動孢子囊的問題，而利用水培法誘導孢子囊易被污染的難題，又大大縮短了游動孢子囊的產生間期。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種辣椒疫霉菌培養基的制備方法及應用。

背景技術

由辣椒疫霉菌引起的疫病是蔬菜生產上的一種毀滅性病害，近年來發生日趨嚴重，造成重大經濟損失，局部地區甚至引起蔬菜絕收。辣椒疫病菌可以侵染辣椒、番茄、黃瓜、西瓜、南瓜和西葫蘆等多種作物的根、莖、葉和果實等部位；該病原以土壤傳播為主，也可以經體表水和水分噴濺從土壤傳到葉面，使其防治難度加大。選育抗病材料是防治該病最經濟有效的措施，而進行抗病性鑒定是篩選抗病材料的前提和基礎，目前主要通過接種孢子囊液來進行抗性鑒定，因此在試驗中均需配置一定濃度的孢子囊懸浮液。由于該病原菌在常規固體培養基上極難產生孢子囊，而采用水培法雖然能快速獲得大量游動孢子囊，但往往在實際試驗中因受多種因素制約易產生雜菌污染。為解決該病原菌游動孢子囊難產生的問題，急需探索并研制出一種新的培養基，病原菌在該培養基上能夠短期內產生足量的孢子囊，可為開展抗病性鑒定提供材料基礎。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是克服目前在常規培養基上產生游動孢子囊的缺陷，進一步提出一種可以較快產生大量游動孢子囊的培養基及其制備方法。

本發明采取的技術方案是：

本發明的辣椒疫霉菌培養基的制備方法的具體步驟如下：

將紅薯洗凈去皮后，切成小塊后于水中煮沸10-60分鐘，然后用雙層紗布過濾，濾液中加入瓊脂，充分攪拌均勻，分裝后置于高壓蒸汽滅菌鍋中滅菌，取出倒入滅菌的培養皿中制成平板，待培養基充分冷卻凝固得到本發明的辣椒疫霉菌培養基。

優選將紅薯洗凈去皮后，切成小塊后于水中煮沸30分鐘。

瓊脂與紅薯的質量比為1：2～5。

滅菌壓力是0.100～0.110MPa、溫度是100～150℃，滅菌時間是10～30min；優選滅菌壓力是0.103MPa、溫度是121℃滅菌時間是20min。

所制備的培養基中紅薯的濃度是30～70g/L。

本發明的方法制備的培養基可以用于誘導辣椒疫霉菌產生游動孢子囊的應用。

誘導方法如下：用直徑6mm打孔器在菌落邊緣打取疫霉菌餅，菌面朝下接種于培養基中央，置于培養箱中27℃恒溫黑暗培養，待菌絲長滿平板后(5-7d)，在光照度2000lx條件下培養48h，即可誘導產生大量游動孢子囊。

本發明的積極效果如下：

本發明通過以紅薯為原料制成培養基，可在短時間內獲得大量疫霉菌游動孢子囊，既解決了在常規固體培養基上極難或較少產生游動孢子囊的問題，而利用水培法誘導孢子囊易被污染的難題，又大大縮短了游動孢子囊的產生間期。利用本發明培養基所獲得的大量游動孢子囊可以用來進行抗性接種鑒定試驗和病原菌生物學研究等，且該培養基原料易得成本低，培養基的制作程序簡單，具有較高的實際研究價值。

附圖說明

圖1是紅薯培養基(50g/L)上的產孢情況的掃描電鏡圖。

圖2是胡蘿卜培養基上的產孢情況掃描電鏡圖。

圖3是燕麥培養基上的產孢情況掃描電鏡圖。