[發(fā)明專利]一種地龍蛋白微球納米創(chuàng)傷復(fù)合物的制備方法及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810673928.4
• 申請(qǐng)日: 2018-06-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108837140B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-12-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王東;楊歡;劉念;權(quán)珍妮;王瑞輝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 陜西中醫(yī)藥大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K38/01
• 分類號(hào): A61K38/01;A61K9/50;A61K47/02;A61P17/02;A61K35/62
• 代理公司: 西安瀚匯專利代理事務(wù)所(普通合伙) 61279
• 代理人: 汪重慶

1.一種地龍蛋白微球納米創(chuàng)傷復(fù)合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、地龍蛋白的制備：將鮮活地龍用生理鹽水清洗三次，除去體表泥沙與污物，剪碎后用壓力破碎的方式獲得細(xì)胞破碎漿，向細(xì)胞破碎漿中加入生理緩沖液在4℃進(jìn)行低速離心5分鐘，除去體內(nèi)泥沙與消化物后得到細(xì)胞破損混合物；在離心管內(nèi)配制含Tris-HCl緩沖液的10％～70％梯度蔗糖溶液，輕置細(xì)胞破損混合物于上述蔗糖溶液上端，于2500rpm離心，分別收集離心管內(nèi)的上層組分、中層組分、下層組分，而后針對(duì)中層組分通過(guò)常規(guī)離子交換法和凝膠色譜法制備地龍蛋白混合物；

S2、納米碳球的制備：稱取40g蔗糖溶解在100ml去離子水中，超聲攪拌過(guò)夜，然后加熱至200℃使其全部碳化，用去離 子水和乙醇/丙酮混合液反復(fù)沖洗，除去碳中雜質(zhì)，然后超聲分散72小時(shí)，得到納米炭球，備用；

S3、過(guò)渡系金屬納米中空微球的制備，具體包括：

S31、稱取0.5mol過(guò)渡系金屬鹽MXn，其中M為過(guò)渡系金屬，加入到已經(jīng)超聲分散好的納米炭球中，在乙醇/水混合液中繼續(xù)超聲分散72小時(shí)，然后除去溶液，添加新的乙醇/水混合溶液繼續(xù)超聲分散72小時(shí)；

S32、然后向S31中加入1g氯化銨繼續(xù)超聲分散1小時(shí)，然后在150℃下加熱12小時(shí)，自然冷卻后過(guò)濾得到沉淀，用乙醇/水混合液將沉淀沖洗3次后在40℃低溫烘干得到烘干產(chǎn)物；

S33、將S32制得的烘干產(chǎn)物以0.5℃/min的升溫速率升至700℃，維持5小時(shí)，然后以1℃/min的速率開(kāi)始降溫至50℃后于室溫冷卻，即得到過(guò)渡系金屬納米中空微球；

S4、地龍蛋白微球納米創(chuàng)傷復(fù)合物的制備：稱取1g過(guò)渡系金屬納米中空微球，加入2mg/ml的由地龍蛋白混合物與溶劑PBS混合而成的地龍蛋白混合液，4℃下攪拌24小時(shí)，離心除去上清液，沉淀部分即為制備好的地龍蛋白微球納米創(chuàng)傷復(fù)合物，于4℃保存。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的地龍蛋白微球納米創(chuàng)傷復(fù)合物的制備方法，其特征在于：所述S31中的納米炭球在乙醇/水混合液中繼續(xù)超聲分散時(shí)，每隔12小時(shí)在80攝氏度機(jī)械攪拌12小時(shí)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的地龍蛋白微球納米創(chuàng)傷復(fù)合物的制備方法，其特征在于：所述S4中的地龍蛋白混合液的pH＝7.5。