[發(fā)明專利]一種林可霉素發(fā)酵液的檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810673844.0
• 申請日: 2018-06-26
• 公開（公告）號: CN108872458B
• 公開（公告）日: 2020-06-16
• 發(fā)明（設計）人: 詹業(yè)奇;萬義斌;葛友群;左飛鴻;楊明;于蓮欣;李進進;羅進;艾嘉皓
• 申請（專利權）人: 江西國藥有限責任公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 南昌新天下專利商標代理有限公司 36115
• 代理人: 宋會英

1.一種林可霉素發(fā)酵液的檢測方法，其特征為：包括以下步驟：

S1：供試品溶液的制備：取林可霉素發(fā)酵液，離心分離去除菌絲體與固體雜質得上清液，取上清液，用流動相稀釋，過濾，作為供試品溶液；

S2：對照品溶液的制備：精密稱取林可霉素對照品置容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻得到對照品溶液；

S3：檢測方法：分別精密吸取對照品溶液及供試品溶液，注入液相色譜儀，測定得到色譜圖，根據(jù)色譜圖計算林可霉素的含量；色譜條件包括：使用Thermo C8色譜柱，流動相為磷酸緩沖液、乙腈與甲醇的混合溶液；

步驟S1及S3中，流動相的制備方法為：吸取13.5ml磷酸加到1000ml的水中，用氨水調節(jié)pH至5.0-8.0，得到磷酸緩沖液，將磷酸緩沖液、乙腈、甲醇按700-800:150:150的體積比混合，過濾，脫氣，即得；

步驟S1中，流動相中還包括體積分數(shù)為0.05-0.5％的十二烷基二甲基甜菜堿；

步驟S1中，采用孔徑為0.22-0.45μm的聚醚砜膜進行過濾。

2.如權利要求1所述的一種林可霉素發(fā)酵液的檢測方法，其特征為：包括以下步驟：

S1：供試品溶液的制備：取林可霉素發(fā)酵液，離心分離去除菌絲體與固體雜質得上清液，取上清液，用流動相稀釋1-10倍體積，過濾，作為供試品溶液；

S2：對照品溶液的制備：精密稱取林可霉素對照品60mg置50ml容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻得到對照品溶液；

S3：檢測方法：分別精密吸取對照品溶液及供試品溶液15-25μL，注入液相色譜儀，測定得到色譜圖，根據(jù)色譜圖計算林可霉素的含量；色譜條件包括：使用Thermo C8色譜柱，流動相為磷酸緩沖液、乙腈與甲醇的混合溶液，色譜柱長200-300mm，內徑為4-5mm，粒徑為2-5μm，柱溫為30-50℃，檢測波長為210nm。

3.如權利要求1所述的一種林可霉素發(fā)酵液的檢測方法，其特征為：步驟S1中，離心分離的條件為4000-10000r/min下離心5-20分鐘。

4.如權利要求1所述的一種林可霉素發(fā)酵液的檢測方法，其特征為：步驟S1中，聚醚砜膜在過濾之前先進行預活化處理：將95％乙醇用聚醚砜膜進行過濾處理15min。

5.如權利要求1所述的一種林可霉素發(fā)酵液的檢測方法，其特征為：步驟S1及S3中，流動相的制備方法為：吸取13.5ml磷酸加到1000ml的水中，用氨水調節(jié)pH至6.0，得到磷酸緩沖液，將磷酸緩沖液、乙腈、甲醇按780:150:150的體積比混合，過濾，脫氣，即得。

6.如權利要求1所述的一種林可霉素發(fā)酵液的檢測方法，其特征為：步驟S3中，流動相的流速為0.5-1.5mL/min。

7.如權利要求1或2所述的一種林可霉素發(fā)酵液的檢測方法，其特征為：包括以下步驟：

S1：供試品溶液的制備：取林可霉素發(fā)酵液，6000r/min離心10分鐘分離去除菌絲體與固體雜質得上清液，取上清液，用流動相稀釋5倍體積，采用孔徑為0.30μm的聚醚砜膜進行過濾，作為供試品溶液；

其中，聚醚砜膜在過濾之前先進行預活化處理：將95％乙醇用聚醚砜膜進行過濾處理15min；

S2：對照品溶液的制備：精密稱取林可霉素對照品60mg置50ml容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻得到對照品溶液；

S3：檢測方法：分別精密吸取對照品溶液及供試品溶液20μL，注入液相色譜儀，測定得到色譜圖，根據(jù)色譜圖計算林可霉素的含量；色譜條件包括：使用Thermo C8色譜柱，流動相為磷酸緩沖液、乙腈與甲醇的混合溶液，流動相的流速為1.0mL/min，色譜柱長250mm，內徑為4.5mm，粒徑為5μm，柱溫為40℃，檢測波長為210nm；

步驟S1及S3中，流動相的制備方法為：吸取13.5ml磷酸加到1000ml的水中，用氨水調節(jié)pH至6.0，得到磷酸緩沖液，將磷酸緩沖液、乙腈、甲醇按780:150:150的體積比混合，過濾，脫氣，即得；

步驟S1中，流動相中還包括體積分數(shù)為0.25％的十二烷基二甲基甜菜堿。