[發明專利]一種靶向結合淋巴癌細胞系的特異性多肽及其應用

有效

• 申請號: 201810667082.3
• 申請日: 2018-06-26
• 公開（公告）號: CN108822189B
• 公開（公告）日: 2021-11-23
• 發明（設計）人: 劉晗青;張雅菲;盧子文;屠志剛;梁智全
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K19/00;A61K47/42;A61K38/16;A61P35/00
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本發明涉及一種靶向結合淋巴癌細胞系的特異性多肽及其應用，屬于生物醫藥領域；發明基于體外噬菌體展示技術，體外淘選并獲得能靶向結合淋巴癌細胞系的特異性多肽TUZG12；經過體外細胞攝取及分布實驗證明所述多肽對淋巴癌細胞系具有靶向結合活性；本發明還通過體外細胞活性實驗結果表明，促凋亡肽DKK偶聯TUZG12多肽后能在一定程度上提高DKK對淋巴癌細胞的增殖活性抑制效果；本發明篩選所得多肽對多個淋巴癌細胞系具有良好的靶向結合活性，并能提高細胞毒性多肽對靶標腫瘤細胞的殺傷作用，對臨床上淋巴瘤的診斷和治療具有重要的應用價值。

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，具體涉及一種靶向結合淋巴癌細胞系的特異性多肽及其應用。

背景技術

與傳統的抗體類靶向分子相比，特異性結合腫瘤的小分子多肽，由于其免疫原性較低，生產成本更低廉，可獲得表面密度更高(每單位表面的肽數量較多，因此這種綴合物的親和力較高)以及組織滲透效果更佳，可作為腫瘤診斷的標記物，又可將其與傳統化療藥物偶聯實現腫瘤的靶向治療。在FDA批準的多肽藥物中，已有一部分多肽藥物被指定用于癌癥治療。亮丙瑞林是一種促性腺激素釋放激素類似物，已被批準用于治療前列腺癌，蛋白體抑制劑硼替佐米用于臨床上治療多發性骨髓瘤。在III期臨床試驗中的環狀RGD肽Cilengitide(EMD121974)已經顯示有希望治療膠質母細胞瘤。Exherin(ADH-1)是一種N-鈣粘蛋白的環狀五肽(Ac-CHAVC)拮抗劑，在I期臨床試驗中耐受良好。應該指出的是，多肽藥物非常適用于癌癥適應癥，多肽對細胞表面受體具有高親和力，其在關鍵的細胞信號傳導途徑中起作用。此外，多肽的生產成本低于單克隆抗體藥物，多肽藥物的優勢使得多肽療法的市場發展迅速。

采用噬菌體展示技術，能夠生物淘選出與癌細胞特異性結合的多肽。噬菌體展示通過將隨機編碼外源多肽鏈的基因與噬菌體外殼蛋白基因融合表達，從而使多肽以融合蛋白形式呈現在噬菌體表面，并能夠保持相對獨立的空間結構和生物學活性，從而形成數量龐大的隨機多肽文庫。

在淘選過程中，噬菌體肽庫與特定靶標孵育，通過洗滌除去未結合的噬菌體，再通過酸或靶蛋白的配體洗脫與靶點結合的噬菌體，選擇適當的宿主細胞繁殖擴增。經3-5輪淘選后，可獲得與靶蛋白高親和力結合的噬菌體克隆。多肽的一級結構可通過DNA序列推算獲得。利用噬菌體展示技術篩選腫瘤靶向肽，具有良好的應用價值。自1985年G.P.Smith最早提出該技術以來，噬菌體展示技術已在體外靶分子淘選、全細胞淘選和體內淘選中得到廣泛的應用，相關研究論文數量已達數千篇。

噬菌體展示是篩選與特定靶點結合的多肽分子的一項強有力技術，并且通常用于鑒定純化蛋白的多肽配體。然而，人工培養的全細胞也可以用作分離細胞結合肽的靶標。相比靶蛋白體外淘選，直接采用全細胞淘選具有一定的優勢：第一，不需要事先對受體結構的了解和分析，受體結構處于天然構象狀態，篩選的過程受細胞膜蛋白的表達水平和空間結構調控，這是純化的蛋白無法模擬的；第二，通過改變洗滌條件，可偏向于介導細胞攝取的多肽的篩選。當使用純化的膜蛋白時，選擇過程往往由由單一的結合驅動；第三，還可以通過淘選發現新的細胞表面標志物。

淋巴瘤特異性標記物一直是臨床腫瘤學的重要研究方向。淋巴瘤準確的診斷和分類是影響治療和預后的關鍵。目前發現的淋巴瘤的標記物有生物標記物和分子標記物兩種。部分標記物為淋巴瘤的分型提供了有利的支持，已經成為細胞學和組織病理學診斷的重要輔助手段，對淋巴瘤的診斷、治療方案的選擇、預后的判定具有重要意義。目前對淋巴瘤診斷具有重要意義的標記物有上皮膜抗原(epithelial membrane antigen，EMA)，分化抗原簇CD15+，分化抗原簇CD20+，CD45+，神經特異性烯醇化酶(neuron specific enolase，NSE)、c-met等。這些標記物已在臨床上廣泛應用，但是由于亞型的不同、標志物特異性差等因素，因此常常需要多種標志物聯合使用。這些標識物既有優勢也有局限性，多個標記物聯合使用勢必增加患者經濟負擔。因此尋找特異性高和敏感性高的標志物迫在眉睫。

發明內容