[發明專利]一種利用藍藻合成丙烯酸的方法

在審

• 申請號: 201810665117.X
• 申請日: 2018-06-25
• 公開（公告）號: CN108728474A
• 公開（公告）日: 2018-11-02
• 發明（設計）人: 蒿飛;朱文博;陳賢情;夏文豪;楊月;王筱;王文;楊慧;江會峰
• 申請（專利權）人: 嘉興欣貝萊生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/74
• 分類號: C12N15/74;C12P7/40;C12R1/01
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務所(普通合伙) 11548
• 代理人: 李靜

1.一種利用藍藻合成丙烯酸的方法，其特征在于：所述方法包括如下步驟：

1)首先，基于藍藻Syn7942的NSI基因構建整合載體NSI，再根據藍藻Syn7942細胞密碼子偏好性優化基因ceaS2的密碼子，然后將此基因插入到載體NSI上，得到重組載體NSI-ceaS2；

2)基于藍藻Syn7942在自然狀態下能夠吸收外源基因的特性，將重組載體NSI-ceaS2轉化至藍藻Syn7942細胞內，然后通過氯霉素固體培養基初步篩選出單克隆轉基因藍藻Syn7942；

3)將篩選出的單克隆轉基因藍藻Syn7942轉接至帶有氯霉素抗性的液體培養基中，待藍藻生長出后，提取藍藻基因組，進行目的基因的PCR驗證；

4)將驗證成功的單克隆轉基因藍藻Syn7942轉接至液體培養基，在一定條件下培養，待藍藻長到OD730大于或等于1時，添加IPTG誘導基因ceaS2的表達，表達的酶以藍藻光合作用產生的三磷酸甘油醛或磷酸二羥基丙酮為底物為底物合成丙烯酸；

5)對產物丙烯酸進行分離提純。

2.根據權利要求1所述的利用藍藻合成丙烯酸的方法，其特征在于：所述步驟2)中氯霉素固體培養基的組成基于專用于培養藍藻的BG11培養基，添加氯霉素和瓊脂，氯霉素終濃度為25-30ug/L，瓊脂終濃度為15g/L，所述BG11培養基配方為：

1)磷酸氫二鉀3.17g/100ml

2)硫酸鎂7.5g/100ml

3)氯化鈣3.6g/100ml

4)檸檬酸0.6g/100ml

5)檸檬酸鐵銨0.6g/100ml

6)EDTA·2Na·2H₂O 0.105g/100ml

7)碳酸鈉2.0g/100ml

8)A5包括：

H₃BO₃ 2.8g/L

MnCl₂·4H₂O 1.81g/L

ZnSO₄·7H₂O 0.22g/L

Na₂MoO₄·2H₂O 0.39g/L

CuSO₄·5H₂O 0.08g/L

CoCl₂·6H₂O 0.01g/L；

配制BG11培養基時，取2)、3)、4)、6)、7)、A5溶液各1mL，加入1.5g NaNO₃，混勻后加蒸餾水定容至1L，然后高溫滅菌，等溶液冷卻后再往里加入1mL的1)和5)溶液，即完成BG11液體培養基配制。