[發(fā)明專利]犬腺病毒1型單克隆抗體、可變區(qū)序列、雜交瘤細(xì)胞株及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810664721.0
• 申請(qǐng)日: 2018-06-25
• 公開（公告）號(hào): CN110632298B
• 公開（公告）日: 2023-04-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 田克恭;鄧均華;李凡
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 洛陽普泰生物技術(shù)有限公司;北京中科基因技術(shù)股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569;G01N33/577
• 代理公司: 北京華夏正合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11017
• 代理人: 韓登營

本發(fā)明提供了具有特異性結(jié)合犬腺病毒1型Fiber蛋白的鼠單克隆抗體的可變區(qū)序列、特異性結(jié)合犬腺病毒1型Fiber蛋白的抗體，該抗體可以用于制備試劑盒和藥物組合物。本發(fā)明的試劑盒克服了現(xiàn)有技術(shù)檢測(cè)靈敏度低的問題，避免了漏檢、假陰性現(xiàn)象發(fā)生，可高靈敏檢測(cè)犬的多種靶標(biāo)，還能高靈敏檢測(cè)非犬動(dòng)物的多種靶標(biāo)；且具有快速、簡便、準(zhǔn)確的優(yōu)勢(shì)；本發(fā)明的藥物組合物能有效預(yù)防和治療CAV?1導(dǎo)致的疾病。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及犬腺病毒1型單克隆抗體、該單克隆抗體的可變區(qū)序列、分泌其的雜交瘤細(xì)胞株，以及使用該單克隆抗體制備的藥物組合物、試劑盒和應(yīng)用，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

犬傳染性肝炎及熊、狐的腦炎均由犬腺病毒1型(Canine?adenovirus?type?I,CAV-1)引發(fā)，呈全球分布。犬傳染性肝炎可感染不同品種、年齡和性別的犬，四季均可發(fā)生，以幼犬的感染率和死亡率最高(高達(dá)25％～40％且可在1-2天突然死亡)；臨床癥狀復(fù)雜，包括嘔吐、腹痛、腹瀉、體溫升高甚至突然死亡、眼睛損傷，還可出現(xiàn)暫時(shí)性角膜渾濁，俗稱“藍(lán)眼病”；易與其它病毒如犬瘟熱病毒、犬細(xì)小病毒、犬副流感病毒混合感染或繼發(fā)感染，從而使病情加重并導(dǎo)致臨床診斷困難。熊、狐的腦炎臨床發(fā)病率約為16.3％，死亡率約為9.7％。CAV-1所引發(fā)的疾病是養(yǎng)犬業(yè)、毛皮動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)危害最大的疫病之一。

目前，CAV-1的檢測(cè)方法包括病毒分離、PCR、血凝試驗(yàn)等方法，但這些方法各有缺點(diǎn)，病毒分離鑒定試驗(yàn)過程繁瑣，耗時(shí)過長，且通過肉眼觀察，較為主觀；以PCR為主的分子生物學(xué)方法對(duì)技術(shù)和設(shè)備要求均較高、操作繁瑣；血凝試驗(yàn)不僅需要紅細(xì)胞且要求現(xiàn)配現(xiàn)用，臨床檢測(cè)時(shí)還易受分泌物或排泄物中的雜質(zhì)干擾，這些檢測(cè)方法均難以在獸醫(yī)臨床現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用。而目前市場(chǎng)上流行的商品化犬腺病毒1型膠體金檢測(cè)試紙條僅有上海快靈生產(chǎn)的一種，檢測(cè)靈敏度低、結(jié)果往往存在假陰性，既而導(dǎo)致散毒、群發(fā)感染的風(fēng)險(xiǎn)。因此，急需研制一種快速簡便準(zhǔn)確的產(chǎn)品以用于臨床診斷。

犬CAV-1、2的預(yù)防、治療目前主要是免疫含犬腺病毒2型的疫苗、高免血清，但疫苗中所含犬腺病毒2型毒株均為弱毒株，免疫動(dòng)物后存在散毒的風(fēng)險(xiǎn)，且免疫后產(chǎn)生抗體尚且需要一段時(shí)間，不能快速建立對(duì)病毒的抵抗能力；而高免血清的制備程序復(fù)雜，不僅需篩選合格的試驗(yàn)動(dòng)物，還要用弱毒、強(qiáng)毒多次免疫(李志敏等.犬多價(jià)高免血清的研制及應(yīng)用.中國免疫學(xué)雜志,2005,21(7):521-523)。

另外，針對(duì)已經(jīng)感染的犬只、狐貍特別是幼犬或幼狐發(fā)病時(shí)，需要針對(duì)發(fā)病的動(dòng)物快速控制病情、進(jìn)行治療，即使免疫現(xiàn)有疫苗也難以在短時(shí)間產(chǎn)生較高的抗體，而中和活性良好的單抗可以大大提高該病的治愈率，因此，治療性單抗對(duì)該病的治療和控制具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

為解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一對(duì)犬腺病毒1型單克隆抗體，以及含單克隆抗體的試劑盒、藥物組合物及其應(yīng)用。

本發(fā)明涉及一種特異性結(jié)合犬腺病毒1型的單克隆抗體4F3的可變區(qū)序列，其中，所述單克隆抗體4F3重鏈可變區(qū)為SEQ.ID?No.1所示序列或其簡并序列編碼或其經(jīng)過一個(gè)或多個(gè)氨基酸添加、刪除、替換或修飾保守性突變獲得的保守性變異體；所述單克隆抗體4F3輕鏈可變區(qū)為SEQ.ID?No.2所示序列或其簡并序列編碼或其經(jīng)過一個(gè)或多個(gè)氨基酸添加、刪除、替換或修飾保守性突變獲得的保守性變異體。

本發(fā)明單克隆抗體4F3的可變區(qū)序列能特異性結(jié)合犬腺病毒1型，其針對(duì)的抗原表位位于纖突蛋白即Fiber蛋白。

本發(fā)明涉及一種特異性結(jié)合犬腺病毒1型的抗體或抗體片段，其中，所述抗體或抗體片段重鏈可變區(qū)為SEQ.ID?No.1所示序列或其簡并序列編碼或其經(jīng)過一個(gè)或多個(gè)氨基酸添加、刪除、替換或修飾保守性突變獲得的保守性變異體；以及所述抗體或抗體片段輕鏈可變區(qū)為SEQ.ID?No.2所示序列或其簡并序列編碼或其經(jīng)過一個(gè)或多個(gè)氨基酸添加、刪除、替換或修飾保守性突變獲得的保守性變異體。