[發明專利]高酶活發酵液的培養方法及提取耐酸α-淀粉酶的方法

在審

• 申請號: 201810660778.3
• 申請日: 2018-06-25
• 公開（公告）號: CN108823185A
• 公開（公告）日: 2018-11-16
• 發明（設計）人: 榮東;徐沖;盧一飛;褚偉立;張曉華;程福寶
• 申請（專利權）人: 安徽新熙盟生物科技有限公司
• 主分類號: C12N9/26
• 分類號: C12N9/26
• 代理公司: 北京細軟智谷知識產權代理有限責任公司 11471
• 代理人: 郭亞芳

1.一種高酶活發酵液的培養方法，其特征在于，包括如下步驟：

(S1)斜面培養：將菌株接種至斜面培養基中進行培養，得到生產菌株；

(S2)種母液培養：取步驟(S1)所述生產菌株，接種至種母液培養基中進行培養，得到種母液；

(S3)一級種子培養：取步驟(S2)所述種母液，接種至一級種子培養基中進行培養，得到一級種子；

所述一級種子培養的培養基的原料組分包括：

玉米漿干粉12-20重量份、豆粕18-25重量份、消泡劑1.5-3重量份、硫酸鎂3-5重量份、磷酸二氫鉀4-9重量份、磷酸氫二鉀30-50重量份、硫酸亞鐵0.015-0.025重量份、氯化錳0.002-0.006重量份、氯化鋅0.005-0.008重量份、葡萄糖15-25重量份、水800-950重量份；

所述一級種子的培養方法，包括如下步驟：

將除葡萄糖以外的各原料充分混合，依次進行調節pH、滅菌、冷卻，得到滅菌冷卻后的混合料；將葡萄糖滅菌、冷卻后，得到滅菌冷卻后的葡萄糖；將所述滅菌冷卻后的葡萄糖加入所述滅菌冷卻后的混合料中，定容，得到滅菌冷卻后的一級種子培養的培養基；無菌條件下在所述培養基上接種種母液，經培養后，得到一級種子；

(S4)發酵培養：取步驟(S3)所述一級種子，接種至發酵培養基中進行培養，得到高酶活發酵液；

所述發酵培養的培養基的原料組分包括：

玉米漿干粉10-25重量份、豆粕12-18重量份、消泡劑0.6-1.2重量份、硫酸鎂3-5重量份、磷酸二氫鉀5-9重量份、磷酸氫二鈉30-60重量份、硫酸亞鐵0.02-0.03重量份、氯化錳0.002-0.005重量份、硫酸鋅0.006-0.008重量份、葡萄糖10-30重量份、水800-950重量份；

所述發酵培養的方法，包括如下步驟：

將除葡萄糖以外的各原料充分混合，依次進行調節pH、滅菌、冷卻，得到滅菌冷卻后的混合料；將葡萄糖滅菌、冷卻后，得到滅菌冷卻后的葡萄糖；將所述滅菌冷卻后的葡萄糖加入所述滅菌冷卻后的混合料中，定容，得到滅菌冷卻后的發酵培養的培養基；無菌條件下在所述滅菌冷卻后的發酵培養的培養基上接種一級種子，經培養后，得到初步發酵液；向所述初步發酵液中加入滅菌冷卻后的補料，繼續培養，即得到所述的高酶活發酵液。

2.根據權利要求1所述的高酶活發酵液的培養方法，其特征在于，

步驟(S3)中，進行所述一級種子培養時，調節所述pH至7.3-7.6；所述滅菌的溫度為121-123℃，所述滅菌的時間為30-50min；所述定容為定容至1m³；控制所述培養的溫度為42-44℃，控制所述攪拌的速度為140-180rpm，控制所述培養的壓力為0.07-0.10MPa；所述培養的時間為10-16h。

3.根據權利要求1所述的高酶活發酵液的培養方法，其特征在于，

步驟(S4)中，進行所述發酵培養時，調節所述pH至7.3-7.6；所述滅菌的溫度為121-123℃，所述滅菌的時間為30-50min；所述定容為定容至10m³；控制所述培養的溫度為42-44℃，控制所述攪拌的速度為110-140rpm，控制所述培養的壓力為0.04-0.08MPa；所述培養的時間為10-18h；所述培養為培養至溶氧20-30；所述發酵培養的補料，由葡萄糖35-65重量份、蔗糖2-10重量份、余量為水組成；所述補料滅菌的溫度為121-123℃，滅菌的時間為25-40分鐘，所述補料冷卻至70℃以下然后定容至3m³；控制所述補料的加入速度為20-30L/h，控制所述溶氧為30以上，控制所述pH為6.40-6.85，繼續所述培養的時間為65-77h。

4.根據權利要求1-3任一項所述的高酶活發酵液的培養方法，其特征在于，所述斜面培養的菌株為地衣芽孢桿菌，所述斜面培養的培養溫度為38℃，所述斜面培養的培養時間為18-26h。

5.根據權利要求1-3任一項所述的高酶活發酵液的培養方法，其特征在于，所述斜面培養的培養基的原料組分包括：乳糖1-3重量份、蛋白胨1.5-2重量份、酵母膏0.3-0.8重量份、氯化鈉0.3-0.6重量份、瓊脂粉1.4-1.8重量份。