[發明專利]一種草甘膦固態降解菌劑的制備方法

在審

• 申請號: 201810657630.4
• 申請日: 2018-06-20
• 公開（公告）號: CN108728386A
• 公開（公告）日: 2018-11-02
• 發明（設計）人: 郭利民;劉銀松
• 申請（專利權）人: 荊門市拓達科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及一種生物炭固定的草甘膦高效降解菌的制備方法，是利用稻殼熱解生產生物炭，與一株草甘膦高效降解菌共培養制備而成。該方法包括(1)菌種的活化；(2)生物炭和半固體培養基制備、pH調解及滅菌；(3)降解菌在半固體培養基中恒溫培養獲得目的產物。該方法生產的草甘膦固態降解菌劑具有生產成本低、環境友好的特點，可高效降解土壤中殘留的草甘膦農藥，在污染土壤返耕、改善農作物產量和質量方面具有較好的潛力。

技術領域

本發明屬于環境生物技術領域，具體涉及一種草甘膦固態降解菌劑的制備方法。

背景技術

草甘膦是一種廣譜滅生型除草劑，對多種農業雜草具有良好的殺傷作用，是當今世界上使用最廣泛、使用量最大的農藥之一。其理化性質穩定，在環境中降解周期較為漫長，對農產品安全存在較大的威脅。2015年，經世界衛生組織確認并公布，草甘膦與癌癥存在一定的關聯，其使用可能會引發人類淋巴腺癌和肺癌。因此，有必要進行相關的研究來修復受草甘膦污染的土壤。

目前，常用的農藥污染土壤修復方法以物理、化學方法為主，包括爐窯焚燒、熱脫附和化學處理等，但是這些方法往往成本高昂且易造成二次污染。近年來，新興的微生物修復技術取得了一定的進展，為農藥污染土壤修復帶來了曙光。然而，由于農藥污染物在固相介質中遷移速度慢、農藥降解工程菌以液體狀態難以遠距離運輸等問題，微生物修復技術的應用仍受到一定的限制。因此，固態農藥降解菌劑的開發和應用，在農藥污染場地的綜合治理中具有重要的應用價值。

發明內容

本發明的目的旨在提供一種草甘膦固態降解菌劑的制備方法，具體采用生物炭共培養固定草甘膦降解菌。

為了實現上述發明目的，本發明采用的技術方案如下：

(1)菌種活化。將保存于-80℃的菌種取出解凍，取適量涂布于含400mg/L 草甘膦為唯一碳源的固體MSM(Minimal Salt Media)培養基上，28℃恒溫培養 24h。挑取單菌落接種于5mL液體LB培養基中，180rpm震蕩培養24h備用。

(2)生物炭制備。將稻殼經水洗兩次后，烘干、粉碎，250-650℃限氧條件下在管式爐中熱解2h，冷卻至室溫，研磨過0.45mm篩，得生物炭。

(3)半固體培養基制備。生物炭、LB培養基、蒸餾水以質量比1:2:2-4混合均勻，以1M NaOH調節pH為7.0，高溫高壓滅菌。

(4)共培養制備草甘膦固態降解菌劑。取步驟(1)活化的菌液，接種于步驟(3)的半固體培養基中，混勻。28℃恒溫、180rpm震蕩培養24-48h，至半固體培養基中菌體數目達10⁸-10⁹數量級。通風風干至菌劑含水量低于30％，得草甘膦固態降解菌劑。

該菌劑可以直接撒施于受草甘膦污染土壤表面或在農作物種植前，穴施于受污染土壤中，使用量約25-50kg/667m²。

本發明所采用的菌株為Aquamicrobiumahrensii，分離自湖北省蘄州鎮蘄農化工有限公司廠區周圍土壤中。該菌可在草甘膦最高濃度為1000mg/L的固體和液體培養基中生長，且對其中所含草甘膦的降解率在48h內即可達到100％，最終降解產物為水、二氧化碳等無機組分。

本發明生產的草甘膦固態降解菌劑，具有廉價、便攜、高效、環境友好的特點。該產品可吸附固定、高效降解土壤中殘留的有機農藥，并為微生物提供良好的棲息環境。同時生物炭已被證明具有改良土壤理化性質、降低養分淋失、提高土壤肥力的作用，因此，本產品在污染土壤返耕、改善農作物產量和質量方面具有較好的潛力。

附圖說明

圖1為不同施加量下，草甘膦固態降解菌劑對草甘膦的降解能力曲線圖。

具體實施方案