[發明專利]一種快速激活淋巴因子激活殺傷細胞LAK的方法

在審

• 申請號: 201810655999.1
• 申請日: 2018-06-23
• 公開（公告）號: CN108753720A
• 公開（公告）日: 2018-11-06
• 發明（設計）人: 何英廣;馬思航
• 申請（專利權）人: 淮安諾康生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;C12P21/06;C07K1/34
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種快速激活淋巴因子激活殺傷細胞LAK的方法，在培養基中添加rIL-2，其特征在于：在培養基中還添加激活劑酶解多肽C。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，具體步驟為：

將臍血單個核細胞用含10％胎牛血清的RPMI 1640培養基(10％FCS-RPMI 1640)調制至2×10⁶/mL，根據細胞總數接種于不同容量的培養容器中，同時加入終濃度為40-60μg/mL的酶解多肽C以及500IU/mL的rIL-2，置于37℃、5％CO₂條件下培養24h；

酶解多肽C的制備方法為：

將脫脂的小麥胚芽粉經木瓜蛋白酶+中性蛋白酶酶解，酶解結束后滅酶處理得到小麥胚芽的酶解液，冷卻后，離心，上清冷凍干燥得凍干粉。

將凍干粉用超純水溶解，依次用截留分子量為10000u、7000u、5000u、3000u的超濾膜對所得到的酶解液凍干粉進行分離，將超濾所得5000u～3000u組分冷凍干燥得到酶解多肽C。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，酶解條件為：經木瓜蛋白酶(酶活力為80萬U/g)+中性蛋白酶(酶活力為20萬U/g)在復合配比3:1、pH為6.0、溫度55℃、底物質量濃度40g/L、加酶量5％(100g底物加5g酶)、酶解時間8h的條件下酶解。

4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：酶解結束后升溫至90℃保持20min進行滅酶處理得到小麥胚芽的酶解液。

5.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，離心條件為：9000rpm離心25min。

6.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：采用聚蔗糖泛影葡胺分層液密度梯度離心法從臍血中分離臍血單個核細胞。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，臍血采集方法為：采用密閉式收集法采集足月順產健康新生兒臍血，而且產前檢查其父母均無遺傳性疾病家族史，采用檸檬酸-磷酸-葡萄糖抗凝的密閉式血袋在胎盤娩出前從臍帶斷端遠離新生兒側采集；采集后4℃冰箱保存，24h內進行分離和凍存處理備用。

8.一種快速激活淋巴因子激活殺傷細胞LAK的培養基，其特征在于：在含10％胎牛血清的RPMI 1640培養基中添加終濃度為40-60μg/mL的酶解多肽C以及500IU/mL的rIL-2。

9.權利要求8所述的培養基在淋巴因子激活殺傷細胞LAK的快速激活方面的應用。