[發(fā)明專利]一種熒光定量PCR探針技術(shù)聯(lián)合檢測沙眼衣原體、淋球菌、生殖道支原體的方法和試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810654566.4
• 申請日: 2018-06-22
• 公開（公告）號: CN108624704B
• 公開（公告）日: 2021-08-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 冀俊峰
• 申請（專利權(quán)）人: 上海孚清生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/06;C12N15/11
• 代理公司: 北京英創(chuàng)嘉友知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11447
• 代理人: 耿超;王浩然

本公開提供了一種引物探針組，該引物探針組用于熒光定量PCR聯(lián)合檢測沙眼衣原體和淋球菌以及生殖道支原體，該引物探針組包括：CT引物對、CT探針、MG引物對、MG探針、NG引物對和NG探針。另一方面，本公開還提供了一種熒光定量PCR聯(lián)合檢測沙眼衣原體和淋球菌以及生殖道支原體的方法。再一方面，本公開還提供了一種熒光定量PCR聯(lián)合檢測沙眼衣原體和淋球菌以及生殖道支原體的試劑盒。通過上述技術(shù)方案，本公開能夠以更高的靈敏度且更好的特異性，實(shí)現(xiàn)對沙眼衣原體、淋球菌和生殖器支原體的聯(lián)合檢測。

技術(shù)領(lǐng)域

本公開涉及醫(yī)藥生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地，涉及一種用于熒光定量PCR聯(lián)合檢測沙眼衣原體和淋球菌以及生殖道支原體的探針引物組、一種熒光定量PCR聯(lián)合檢測沙眼衣原體和淋球菌以及生殖道支原體的方法以及一種熒光定量PCR聯(lián)合檢測沙眼衣原體和淋球菌以及生殖道支原體的試劑盒。

背景技術(shù)

世界衛(wèi)生組織估計全球每年約有3.4億新增性傳播感染病例，其中沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis，CT)和淋球菌(Neisseria gonorrhoeae，NG)以及生殖道支原體(Mycoplasma genitourinary，MG)是最常見的三種病原體，導(dǎo)致了包括宮頸炎、盆腔炎、淋病、急性尿道綜合癥等多種不同癥狀的性病，并由此進(jìn)一步導(dǎo)致不孕、胚胎夭折、低體質(zhì)量胎兒和死胎等嚴(yán)重后果。因此開展沙眼衣原體、淋球菌和生殖器支原體的病原檢測及鑒定對于臨床性病的早期發(fā)現(xiàn)、早期治療、降低疾病風(fēng)險和控制傳染性疾病具有重要的意義。

已經(jīng)有多份文獻(xiàn)公開了沙眼衣原體、淋球菌和生殖器支原體的聯(lián)合檢測。例如：CN101935686A公開了一種淋球菌、人型支原體、生殖器支原體、沙眼衣原體、解脲支原體的檢測方法和試劑盒，其中使用了多重PCR凝膠電泳分離方法；CN102277429A公開了一種淋球菌、沙眼衣原體及解脲脲原體的試劑盒，其中使用了芯片法；CN102888464A公開了在單個PCR反應(yīng)容器中五重檢測淋病奈瑟菌、沙眼衣原體、解脲支原體、人型支原體和生殖器支原體檢測試劑盒，其中使用了熒光探針PCR法。

但是，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，已有的沙眼衣原體、淋球菌和生殖器支原體的聯(lián)合檢測方法存在靈敏度低和特異性差的缺陷。

發(fā)明內(nèi)容

本公開的目的是克服已有的沙眼衣原體、淋球菌和生殖器支原體的聯(lián)合檢測方法存在靈敏度低和特異性差的缺陷，提供一種靈敏度高且特異性好的聯(lián)合檢測沙眼衣原體、淋球菌和生殖器支原體的方法。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，一方面，本公開提供了一種引物探針組，該引物探針組用于熒光定量PCR聯(lián)合檢測沙眼衣原體和淋球菌以及生殖道支原體，其特征在于，該引物探針組包括：CT引物對、CT探針、MG引物對、MG探針、NG引物對和NG探針；其中，所述CT引物對包括SEQID NO.1所示的正向CT引物和SEQ ID NO.2所示的反向CT引物；所述CT探針如SEQ ID NO.3所示且標(biāo)記有第一熒光基團(tuán)；所述MG引物對包括SEQ ID NO.4所示的正向MG引物和SEQ IDNO.5所示的反向MG引物；所述MG探針如SEQ ID NO.6所示且標(biāo)記有第二熒光基團(tuán)；所述NG引物對包括SEQ ID NO.7所示的正向MG引物和SEQ ID NO.8所示的反向MG引物；所述MG探針如SEQ ID NO.9所示且標(biāo)記有第三熒光基團(tuán)；所述第一熒光基團(tuán)、所述第二熒光基團(tuán)和所述第三熒光基團(tuán)彼此相同或不同。

另一方面，本公開還提供了一種熒光定量PCR聯(lián)合檢測沙眼衣原體和淋球菌以及生殖道支原體的方法，所述方法包括如下步驟：(1)提取待測樣本的總DNA；(2)以所述總DNA為模板，并使用如上所述的引物探針組，進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng)；(3)收集不同檢測通道的熒光信號，得到檢測結(jié)果；a)若所述第一熒光基團(tuán)對應(yīng)的熒光通道有擴(kuò)增曲線，則判定樣品中含有沙眼衣原體；b)若所述第二熒光基團(tuán)對應(yīng)的熒光通道有擴(kuò)增曲線，則判定樣品中含有生殖道支原體；c)若所述第三熒光基團(tuán)對應(yīng)的熒光通道有擴(kuò)增曲線，則判定樣品中含有淋球菌。