[發(fā)明專利]原花青素在miR-9表達調(diào)控中的應用

在審

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• 申請日: 2018-06-22
• 公開（公告）號: CN108685897A
• 公開（公告）日: 2018-10-23
• 發(fā)明（設計）人: 邵東燕;師俊玲;邸毅超;黃慶生;廉紫陽;蔣春美
• 申請（專利權(quán)）人: 西北工業(yè)大學
• 主分類號: A61K31/352
• 分類號: A61K31/352;A61P9/10
• 代理公司: 西安恒泰知識產(chǎn)權(quán)代理事務所 61216
• 代理人: 史玫

本發(fā)明公開了原花青素在miR?9表達調(diào)控中的應用。基于本發(fā)明的應用，在巨噬細胞泡沫化過程中加入原花青素提高巨噬細胞中miR?9的表達水平。本發(fā)明分別利用miR?9抑制劑和模擬物降低和升高miR?9的表達量，分別觀察到對原花青素抑制巨噬細胞泡沫化作用的阻礙和促進功能，發(fā)現(xiàn)并證明了原花青素對巨噬細胞泡沫化緩解作用及后續(xù)對動脈粥樣硬化的治療或預防潛力。

技術領域

本發(fā)明涉及原花青素的新應用，具體涉及原花青素調(diào)控miR-9的表達的應用。

背景技術

心血管疾病已經(jīng)成為全球頭號健康問題。在世界范圍內(nèi)，每年約有1670萬人死于心血管疾病，占全球死亡率第一位。截至2014年，我國已有2.9億人存在心血管健康問題，而且今后10年患病人數(shù)仍將快速增長。動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是心血管疾病發(fā)生發(fā)展的重要病理基礎。巨噬細胞泡沫化，即巨噬細胞吞噬大量脂質(zhì)(oxygenized lowdensity lipoprotein，ox-LDL，富含膽固醇)形成泡沫細胞是AS至關重要的環(huán)節(jié)，是AS斑塊發(fā)病早期的標志性事件之一。

發(fā)明內(nèi)容

原花青素是廣泛存在于植物界中如葡萄、葡萄籽、可可豆、蘋果、花生、高粱及櫻桃等中的多酚類化合物，尤其以葡萄籽中含量最為豐富。發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)原花青素通過miR-9對巨噬細胞泡沫化的影響：通過油紅O染色實驗觀察及細胞內(nèi)總膽固醇(TC)、游離膽固醇(FC)含量和膽固醇酯/總膽固醇(CE/TC)的檢測發(fā)現(xiàn)原花青素處理后巨噬細胞內(nèi)脂滴含量減少，TC和CE/TC值顯著降低，說明巨噬細胞泡沫化程度顯著下降。之后檢測miR-9的表達水平發(fā)現(xiàn)原花青素可以顯著提高miR-9表達水平，同時miR-9的靶基因ACAT1(膽固醇酯酶)表達水平顯著降低。

基于上述發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明提供了原花青素在miR-9表達調(diào)控中的應用。本發(fā)明的原花青素可為葡萄籽原花青素、可可豆原花青素、蘋果原花青素、花生原花青素、高粱原花青素、櫻桃原花青素常見原花青素。

本發(fā)明同時提供一種miR-9表達調(diào)控方法，方法包括在巨噬細胞泡沫化過程中加入原花青素提高巨噬細胞中miR-9的表達水平。本領域適用的巨噬細胞均適用于本發(fā)明。

本發(fā)明還提供了原花青素在基因ACAT1表達調(diào)控中的應用。

本發(fā)明進一步提供了一種基因ACAT1表達調(diào)控方法，方法包括在巨噬細胞泡沫化過程中加入原花青素降低巨噬細胞中ACAT1的表達水平。

發(fā)明人分別利用miR-9抑制劑和模擬物降低和升高miR-9的表達量，分別觀察到對原花青素抑制巨噬細胞泡沫化作用的阻礙和促進功能，發(fā)現(xiàn)并證明了原花青素對巨噬細胞泡沫化緩解作用及后續(xù)對動脈粥樣硬化的治療或預防潛力。

附圖說明

圖1為原花青素處理后巨噬細胞內(nèi)脂質(zhì)堆積情況；a.Ox-LDL對照組；b.原花青素處理組；c.油紅O半定量結(jié)果。

圖2為原花青素處理對巨噬細胞膽固醇含量的影響；a.總膽固醇(TC)、游離膽固醇(FC)；b.膽固醇酯/總膽固醇比率(CE/TC)。

圖3為原花青素處理對miR-9和ACAT1表達水平的影響。

圖4為miR-9抑制劑和模擬物對原花青素抑制巨噬細胞脂質(zhì)含量的影響；a.miR-9抑制劑處理組；b.miR-9抑制劑陰性對照組；c.miR-9模擬物處理組；d.miR-9模擬物陰性對照組；e.油紅O半定量結(jié)果。

具體實施方式

實施例1：油紅O染色和膽固醇含量檢測實驗

人單核THP-1細胞，經(jīng)復蘇、傳代后，接種于含有10％胎牛血清、青霉素和鏈霉素各1.0×10⁵U/L的RPMI 1640培養(yǎng)液中，于37℃，5％ CO₂培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)，每隔2天更換培養(yǎng)液1次，恢復活力。