[發(fā)明專利]一種胰酶的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810647412.2
• 申請日: 2018-06-22
• 公開（公告）號: CN108795920B
• 公開（公告）日: 2022-04-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 殷文靜
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州良辰生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12N9/94
• 分類號: C12N9/94
• 代理公司: 蘇州創(chuàng)元專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 32103
• 代理人: 汪青;周敏

本發(fā)明涉及一種胰酶的制備方法，將胰腺磨碎，然后加入過氧化氫得到混合物，其中，所述的過氧化氫在所述的混合物中的質(zhì)量百分濃度為0.1%~2%，攪拌1~8h，加入觸酶反應(yīng)0.5~2h，然后經(jīng)脫脂、激活、沉淀、干燥制得胰酶。本發(fā)明的過氧化氫可以在較短時(shí)間內(nèi)和病毒充分接觸從而達(dá)到病毒滅活的目的，另外，殘留的過氧化氫通過觸酶分解成水和氧氣，從而使得胰酶中無過氧化氫的殘留，從而極大的增強(qiáng)了藥物的病毒安全性，使得胰酶產(chǎn)品可以符合各國藥典和動(dòng)物來源的生化藥物法規(guī)方面的苛刻要求。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種胰酶的制備方法。

背景技術(shù)

胰酶是從豬、牛、羊等哺乳動(dòng)物的胰臟中提取得到的一種混合酶制劑，主要成分為胰蛋白酶、胰淀粉酶、胰脂肪酶，還有羧肽酶、糜蛋白酶、彈性蛋白酶、激肽釋放酶和核糖核酸酶等。早至1938年，胰酶產(chǎn)品就已經(jīng)被用于囊泡性纖維癥和慢性胰腺炎，且大多數(shù)病人需要終身服用。目前，胰酶已是各國藥典收載的助消化藥品，臨床上用于治療消化不良、食欲不振及肝胰疾患引起的消化障礙。由于胰酶中含有多種活性物質(zhì)，可作為原料藥從中提取所需生化物質(zhì)。此外，胰酶還被廣泛用于細(xì)胞培養(yǎng)以生產(chǎn)治療用生物制品如單抗、細(xì)胞因子等。

由于胰酶來源于動(dòng)物的提取物，其原料中存在病毒污染的風(fēng)險(xiǎn)。FDA、CFDA、EMA等各國法規(guī)中均有明確規(guī)定，必須進(jìn)行病毒滅活和病毒安全評價(jià)。2006年，F(xiàn)DA出版Guidancefor Industry on Exocrine Pancreatic Insufficiency Drug Products，其中對胰酶產(chǎn)品的病毒安全性作出如下描述（1）制造商需要對其進(jìn)行完整的病毒風(fēng)險(xiǎn)評估（2）按照ICHQ5A的要求驗(yàn)證生產(chǎn)工藝的病毒去除/滅活能力。

而現(xiàn)有技術(shù)中，胰酶的生產(chǎn)過程包括：胰臟磨漿、丙酮脫脂、激活、丙酮沉淀提取、烘干，由于制造工藝的限制，胰酶生產(chǎn)中的丙酮脫脂和烘干條件很難滅活一些理化抵抗力較高的非脂包膜病毒如PPV（豬細(xì)小病毒）、PCV（豬圓環(huán)病毒）和HEV（戊型肝炎病毒），使得以胰酶作為API、細(xì)胞培養(yǎng)原料大大增加了病毒污染的風(fēng)險(xiǎn)。而傳統(tǒng)的病毒滅活方法如強(qiáng)堿、高溫加熱、輻照均會(huì)對酶活產(chǎn)生較大的影響。

在專利“在生產(chǎn)胰酶制劑過程中減少或滅活病毒和微生物內(nèi)容物的方法（CN107849552 A）”中，公開了用過乙氧酸預(yù)先處理豬胰腺，然后清洗去掉殘留的過氧乙酸，并從經(jīng)處理的腺體組織中提取胰酶。上述用過氧乙酸處理的方法中，由于病毒是寄生于細(xì)胞內(nèi)部，該專利所述的方法只能滅活腺體組織表面的微生物，對于細(xì)胞內(nèi)部的病毒滅活效果十分有限，具有一定的缺陷。

專利US 2011/0268844 A1中公開了用4000、5000或6000巴的超高壓處理5分鐘處理胰酶制劑以滅活病毒。該方法的缺陷是高壓處理對某些病毒的滅活作用是不確定的，而且，超高壓設(shè)備成本昂貴，生產(chǎn)費(fèi)用高，在生產(chǎn)實(shí)踐中基本是不可取的。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種病毒滅活效果好的胰酶的制備方法。

為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種胰酶的制備方法，將胰腺磨碎，然后加入過氧化氫得到混合物，其中，所述的過氧化氫在所述的混合物中的質(zhì)量百分濃度為0.1%~2%，攪拌1~8h，加入觸酶反應(yīng)0.5~2h，然后經(jīng)脫脂、激活、沉淀、干燥制得胰酶。

優(yōu)選地，所述的胰腺磨碎后，自溶4~16h后，加入所述的過氧化氫。

優(yōu)選地，所述的混合物在2~15℃下進(jìn)行所述的攪拌。

優(yōu)選地，每1mg過氧化氫加入100~1000 u的觸酶。

優(yōu)選地，所述的觸酶為來自細(xì)菌或霉菌的代謝產(chǎn)物，例如，購自泰安信得利生物工程有限公司的50000u/ml液體酶或南寧龐博生物100000U/g酶粉。

優(yōu)選地，加入所述的觸酶后，在5~15℃下進(jìn)行反應(yīng)20~60min。