[發明專利]一種性能優異的亮氨酸氨基肽酶檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201810647159.0
• 申請日: 2018-06-22
• 公開（公告）號: CN108913752A
• 公開（公告）日: 2018-11-30
• 發明（設計）人: 羅維曉;甘宜梧;段洪東;李建營
• 申請（專利權）人: 山東博科生物產業有限公司
• 主分類號: C12Q1/37
• 分類號: C12Q1/37
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種性能優異的亮氨酸氨基肽酶檢測試劑盒，本試劑盒采用連續監測法檢測血液中的亮氨酸氨基肽酶，屬于臨床體外檢測試劑技術領域。本發明試劑盒僅包括試劑R。通過往試劑R中優先選擇了B?R緩沖液，試劑中加入了適量的聚乙二醇2萬、N?β?羥基乙基乙二胺三乙酸、氯化鈉、L?亮氨酰?2?萘胺鹽酸鹽、Brom?nitro?dioxan(BND)、提高了試劑盒的穩定性，線性范圍較好，試劑的準確度好，成本低等優點，本發明有利于在市場中進一步的推廣使用。

技術領域

本發明涉及臨床體外檢測試劑技術領域，特別涉及一種性能優異的亮氨酸氨基肽酶檢測試劑盒。

背景技術

亮氨酸氨基肽酶(leucine aminopeptidase，LAP)是一類廣泛存在于人體組織中的蛋白水解酶，廣泛分布于人體的肝、胰、膽、腎、小腸及子宮等組織中，尤以肝臟中含量最為豐富。亮氨酸氨基肽酶能夠特異性地水解N-末端為亮氨酸的肽鏈，在各種生命活動中起重要作用。

肝臟中含有豐富的LAP，參與極其復雜的代謝功能，當肝細胞病變引起大量分裂增殖，大量合成分泌的LAP等酶釋放入血而使其活性升高，因此根據血清中酶活性的增高，可判斷肝臟病變的性質和程度從而診斷疾病。各類肝病患者因肝細胞損傷，血清LAP的活性均有不同程度的升高。一般慢性肝炎從輕度、中度到重度，血清LAP水平隨之升高，能一定程度上反映病情的輕重，而且原發性肝癌LAP增高尤為顯著。因此，血清LAP活性的檢測能從不同側面反映各種肝病的發生、發展。除了臨床上公認的甲型胎兒蛋白、丙氨酸轉氨酶、天冬氨酸轉氨酶、谷酰轉氨酶等指標外，近年來，血清LAP的活性作為對各類肝病的診斷及病情估計的良好酶學指標受到重視。

目前，用于亮氨酸氨基肽酶的檢測方法主要有連續監測法、二甲氨基苯甲醛顯色法及熒光法等。LAP對底物的特異性要求不高，能水解多種L-亮氨酸衍生物，目前血清LAP活性測定多采用L-亮氨酰-2-萘胺、L-亮氨酰-p-硝基苯胺或L-亮氨酰羧基苯胺為底物。基于LAP催化水解各底物產生有色的芳胺衍生物來定量酶，目前L-亮氨酰-p-硝基苯胺(Leu-pNA)作為底物最為常用，但是該底物在設計成為單試劑時，容易發生底物變色，會較大影響檢測就結果，而L-亮氨酰-2-萘胺相對其他底物更加穩定有效。因此，本發明以L-亮氨酰-β-萘胺為底物，提供一種性能優異的用連續監測法檢測亮氨酸氨基肽酶的試劑盒，優化其反應體系，使其重復性好、穩定性好、可進行批量樣本全自動化檢測。

發明內容

本發明的目的是提供一種性能優異的穩定性好的用于檢測亮氨酸氨基肽酶的試劑盒，該試劑盒采用連續監測法。該試劑盒與常規的試劑盒相比，穩定性和線性范圍比常規的檢測試劑盒要好有利于試劑在臨床上的推廣應用。

基本原理：

本試劑盒以L-亮氨酰-2-萘胺鹽酸鹽為底物，亮氨酸氨基肽酶將其分解釋放出黃色的2-萘胺，在主波長450nm，副波長為660nm處檢測吸光度變化率，測得亮氨酸氨基肽酶的活性值。

發明是通過以下步驟得到的：

一種性能優異的亮氨酸氨基肽酶檢測試劑盒，其特征在于包含試劑R。其試劑組成為：40mmol/LpH為8.6的B-R緩沖液、20g/L聚乙二醇2萬、10mmol/L N-β-羥基乙基乙二胺三乙酸、50mmol/L氯化鈉、4.8mmol/LL-亮氨酰-2-萘胺鹽酸鹽、10mmol/LBrom-nitro-dioxan(BND)。

所述的亮氨酸氨基肽酶檢測試劑盒，其特征在于試劑緩沖液為25℃，pH為8.6的B-R緩沖液。

所述的亮氨酸氨基肽酶檢測試劑盒，其特征在于所述表面活性劑為聚乙二醇2萬。

所述的亮氨酸氨基肽酶檢測試劑盒，其特征在于所述穩定劑為N-β-羥基乙基乙二胺三乙酸。

所述的亮氨酸氨基肽酶檢測試劑盒，其特征在于，使用全自動生化分析儀采用速率法進行測定，檢測主波長為450nm，副波長為660nm。