[發明專利]一種以腫瘤細胞原位生物合成多功能金屬納米探針的方法

在審

• 申請號: 201810645708.0
• 申請日: 2018-06-21
• 公開（公告）號: CN108956563A
• 公開（公告）日: 2018-12-07
• 發明（設計）人: 王雪梅;姜暉;李春梅;阮俊;陳蕓;張航
• 申請（專利權）人: 東南大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 南京眾聯專利代理有限公司 32206
• 代理人: 朱欣欣

本發明涉及一種以腫瘤細胞原位生物合成金屬納米探針的方法，具體步驟如下：將金屬可溶性鹽、DNA或RNA鏈與腫瘤細胞在細胞培養基中共同孵育12?24小時，然后在1000?2500 r/min的速率下離心提取出孵育后的腫瘤細胞、用緩沖溶液清洗所述孵育后的腫瘤細胞3?5次，破碎清洗孵育后的腫瘤細胞，分離、提取所述孵育后的腫瘤細胞內的多功能金屬納米探針，該多功能金屬納米探針具有較好的生物相容性，大大提高了其在生物標記、成像、傳感和腫瘤治療等領域的應用潛能。

技術領域

本發明涉及材料制備領域，特別涉及一種以腫瘤細胞原位生物合成多功能金屬納米探針的方法。

背景技術

原位熒光生物成像在腫瘤診斷分析中具有十分重要的意義。一般對目標分子、腫瘤細胞或組織進行標記并結合光學顯微成像技術，實現對腫瘤細胞或組織的生理病變生物過程以及治療藥物對腫瘤細胞或組織作用過程進行可視化的分析和監測。近年來，由于對金屬納米探針研究的白熱化，金屬納米探針已經成為標記腫瘤細胞或組織的新興材料。

近年來，生物相容性好、熒光強度高的金屬納米探針(如金、銀等)頗受研究人員的青睞，其尺寸通常小于2 nm，具有強的可見-近紅外熒光，與傳統的有機染料相比金屬納米探針效率較高，抗光漂白能力較強，斯托克位移較大；其相比半導體量子點生物毒性更小，生物相容性更好。此外，金屬納米探針比表面積大、催化活性高、表面性質可以根據實際應用的要求進行調節，熒光發射波長在紫外、可見和紅外范圍內可調，所以其在生物標記、成像和傳感、單分子光譜、催化、數據存儲和化學傳感等很多領域都有潛在的應用價值。

迄今為止，已發展了多種金屬納米探針的合成方法，例如水熱法、模板合成法、化學還原法、“一鍋煮”合成方法等。然而這些方法或多或少存在一些不足，例如基于“一鍋煮”方法合成的金屬納米探針表面含有大量的包裹劑，且多數包裹劑含有一些毒性，在進行生物標記或成像的過程中造成細胞的死亡。因此，急切需要研制一種綠色、低能耗、環境友好型的方法來合成金屬納米探針，如，原位生物合成方法，對于深入了解金屬納米探針的性質具有實際意義，同時也為金屬納米探針的合成方法提供了新的思路。

發明內容

本發明針對現有技術中存在的不足，提供了一種以腫瘤細胞原位生物合成多功能金屬納米探針的方法，以解決現有技術中存在的問題。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案如下：

一種以腫瘤細胞原位生物合成多功能金屬納米探針的方法，具體步驟如下：（1）將金屬可溶性鹽、DNA或RNA鏈以及腫瘤細胞在細胞培養基中進行孵育12-24小時，其中所述DNA或RNA鏈通過化學合成；

（2）將溶液在1000-2500r/min的速率下離心提取出孵育后的腫瘤細胞；

（3）用緩沖溶液清洗孵育后的腫瘤細胞3-5次；

（4）破碎清洗孵育后的腫瘤細胞，并進行分離、提取，即可得到多功能金屬納米探針。

作為本發明的一種改進，所述步驟（1）中金屬可溶性鹽為氯金酸、氯鉑酸、硝酸銀、氯化亞鐵、葡萄糖酸鋅、硫酸鎂、硫酸銅、可溶性含錳鹽中一種或任意幾種組合。金屬可溶性鹽為具有生物相容性的金屬元素對應的可溶性鹽。

作為本發明的一種改進，所述步驟（1）中腫瘤細胞為肝癌（HepG2）細胞、白血?。↘562）細胞、宮頸癌（HeLa）細胞、膠質瘤細胞（U87MG）、肺癌細胞、鼻咽癌細胞、食管癌細胞、胃癌細胞、大腸癌細胞、乳腺癌細胞、淋巴瘤細胞中的一種或任意幾種組合。

作為本發明的一種改進，所述步驟（3）中緩沖溶液為磷酸鹽緩沖溶液、巴比妥鈉-鹽酸緩沖溶液、Tris-鹽酸緩沖溶液中一種或任意幾種組合。

作為本發明的一種改進，所述的多功能金屬納米探針在生物成像中的應用。

作為本發明的一種改進，所述的多功能金屬納米探針在腫瘤治療中的應用。