[發明專利]簇生朝天椒可育胞質的分子鑒定標記及保持系選育方法

有效

• 申請號: 201810642029.8
• 申請日: 2018-06-21
• 公開（公告）號: CN108841982B
• 公開（公告）日: 2019-04-26
• 發明（設計）人: 林多;姜童;王輝
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11;A01H1/02;A01H1/04
• 代理公司: 青島合創知識產權代理事務所(普通合伙) 37264
• 代理人: 王曉曉

1.簇生朝天椒可育胞質的分子鑒定標記的擴增引物，其特征在于所述分子鑒定標記為Mt_InDel₁₀，其引物序列為：

Mt_InDel₁₀-F：5’-CGCCATTTCTTTCCTTCAAT-3’；

Mt_InDel₁₀-R：5’- GTTCACCCCTTCGGCTTCT-3’。

2.利用權利要求1所述的分子鑒定標記的擴增引物的保持系選育方法，其特征在于所述選育方法包括以下步驟：

（1）選擇結果多、果實端正、生長勢強、無病蟲害的簇生朝天椒優良品種，取飽滿種子；

（2）將飽滿種子消毒并漂洗干凈；然后進行浸種催芽，將發芽的種子移至黑暗環境下，繼續培養黃化苗；

（3）將所述黃化苗去除子葉上的種皮和根，選取地上組織提取線粒體DNA；

（4）以線粒體DNA為模板以所述Mt_InDel₁₀的引物為引物進行簇生朝天椒PCR擴增；取擴增產物進行電泳分離分析，根據目的片段大小是否為128bp選取具有可育胞質的優良品種；

對選取的具有可育胞質的優良品種，進一步利用100%雄性不育系進行測交，母本為隔離種植的100%雄性不育系，父本為隔離種植的所述具有可育胞質的優良品種；

如果測交后代群體85%-100%雄性不育，則其父本為具有可育胞質品種，且其細胞核基因型為msms，入選保持系；

如果測交后代雄性不育：雄性可育=1:1，則其父本為具有可育胞質品種，入選保持系；以母本為100%雄性不育系單株，父本為此保持系自交后代并單株掛牌標記的單株，雜交后代中的全部可育株系淘汰，雜交后代中的雄性不育率大于85%的不育株系入選，其對應的父本株系，則為入選的保持系；飽和回交，選育出胞質雄性不育同型保持系，細胞核基因型為msms；

如果測交后代85-100%雄性可育，則其父本為具有可育胞質品種，其細胞核基因型為MsMs，淘汰。

3.根據權利要求2所述的保持系選育方法，其特征在于：所述步驟（2）中將辣椒飽滿種子放入50℃-55℃熱水中恒溫浸種15-20分鐘，然后加入冷水降到20℃-30℃。

4.根據權利要求2所述的保持系選育方法，其特征在于：所述步驟（2）中催芽的溫度為28℃-30℃。

5.根據權利要求2所述的保持系選育方法，其特征在于：所述步驟（2）中黃化苗培養16-20天。

6.根據權利要求2所述的保持系選育方法，其特征在于：所述步驟（3）中線粒體DNA的濃度在60~260 ng/μL間。

7.根據權利要求2所述的保持系選育方法，其特征在于：所述步驟（4）中PCR反應體系為：取線粒體DNA模板2 μL，正反引物各1 μL，2×Go Taq R Colorless Master Mix 3.5 μL，ddH₂O 7.5 μL。

8.根據權利要求7所述的保持系選育方法，其特征在于：所述步驟（4）中PCR反應程序為：94℃預變性5 min；94 ℃預變性1 min；56.8 ℃退火45 s；72 ℃延伸1 min；72℃總延伸10 min；4 ℃保存擴增產物；共35個循環數。