[發明專利]一種細胞培養液、利用該細胞培養液制備富血小板血漿的方法及制得的富血小板血漿

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• 申請號: 201810638692.0
• 申請日: 2018-06-20
• 公開（公告）號: CN108795857A
• 公開（公告）日: 2018-11-13
• 發明（設計）人: 熊仲川
• 申請（專利權）人: 四川瑞興和弘健康咨詢有限公司
• 主分類號: C12N5/078
• 分類號: C12N5/078;A61K35/16;A61P17/14
• 代理公司: 成都頂峰專利事務所(普通合伙) 51224
• 代理人: 李崧巖

本發明屬于生物醫藥技術領域，公開了一種細胞培養液，主要由以下體積百分數的組分組成：2.5％的維生素C、2.5％的N?乙酰氨基酸、1.5％的支鏈氨基酸，余量為常規細胞培養基。本發明還提供了利用該細胞培養液提取血小板血漿的方法。本發明提供的細胞培養液配方簡單，成本低，可有效促進血液中的血小板及白細胞分泌有益生長因子。該細胞培養液與本發明提供的富血小板血漿的制備方法相結合，可快速制備含有大量有益生長因子并且無污染可直接注射的富血小板血漿，可有效治療脂溢性脫發。

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，具體涉及一種細胞培養液、利用該細胞培養液制備富血小板血漿的方法及制得的富血小板血漿。

背景技術

脂溢性脫發的患者往往由于雄激素在局部組織中代謝異常，通過5α還原酶的作用使活性低的睪酮轉化為活性高的二氫睪酮(DHT)，而DHT與雄激素受體有很強的親和力，可與雄激素受體結合而進入細胞核起作用，使毛囊過早成熟，生長期縮短而提前進入休止期，毛囊漸變小，毛發變得細短，進而脫發，目前對于脫發的治療一般是采用植發，還沒有有效的手段可使脫發患者在短時間內生發。富血小板血漿(PRP)是利用自身血液制作的富含血小板的高濃度血漿，其中包含多種生長因子如血管內皮生長因子(VEGF)、轉化生長因子TGF-β1、血小板衍生生長因子(PDGF)、胰島素樣生長因子IGF-I、IGF-II、纖維蛋白、纖維結合蛋白分子、促進炎癥反應、細胞增殖和分化等的因子，在創面損傷修復中應用較廣。

然而，目前PRP的提取主要是二次離心法，主要存在以下缺點：開放式的制備體系容易受到外界污染，提取PRP時在多個容器間轉移，增加了血小板被污染和激活的機率，操作人員的個人操作習慣極大地影響了PRP中血小板的濃度，以上因素導致制備的PRP中血小板獲取率較低且各指標變異系數大，極大程度地限制了PRP的應用。因此，急需開發一種能快速提取含有大量有益成分且不易污染的PRP的方法。

發明內容

為了解決現有技術存在的上述問題，本發明目的在于提供一種細胞培養液、利用該細胞培養液制備富血小板血漿的方法及制得的富血小板血漿。

本發明所采用的技術方案為：

本發明提供了一種細胞培養液，主要由以下體積百分數的組分組成：2.5％的維生素C、2.5％的N-乙酰氨基酸、1.5％的支鏈氨基酸，余量為常規細胞培養基。

具體的，上述細胞培養液，所述N-乙酰氨基酸中的氨基酸L-蛋氨酸、L- 蘇氨酸、L-組氨酸、L-谷氨酰胺、L-異亮氨酸、L-亮氨酸、L-賴氨酸、L-苯丙氨酸、L-色氨酸或L-纈氨酸，所述支鏈氨基酸為亮氨酸。

具體的，上述細胞培養液，所述細胞培養基為DMEM培養基、H3無血清培養基或RPMI-1640培養基。

本發明還提供了一種富血小板血漿的制備方法，包括以下步驟：

S1：取外周血，向外周血中加入前述的細胞培養液，混勻，得到混合液一；

S2：將上述混合液一靜置培養，得到混合液二；

S3：將步驟S2所述的混合液二離心，取上清液和中間細胞層，即得到所述富血小板血漿。

具體的，上述制備方法，所述步驟S1中外周血的體積與所述細胞培養液的比例為20:1。

具體的，上述制備方法，所述步驟S2中培養的溫度為37℃，培養時的CO₂濃度為5％，培養時間為4h。

具體的，上述制備方法，所述步驟S3中離心時離心力為26G，離心時間為 15min。

一種通過前述制備方法制備的富血小板血漿。

本發明的有益效果為：