[發明專利]一種菌絲霉素單克隆抗體及檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201810632569.8
• 申請日: 2018-06-20
• 公開（公告）號: CN108948191B
• 公開（公告）日: 2021-10-22
• 發明（設計）人: 梁偉凡;周玉巖;范惠敏
• 申請（專利權）人: 廣東海納川生物科技股份有限公司
• 主分類號: C07K16/14
• 分類號: C07K16/14;C12N5/20;G01N33/577
• 代理公司: 深圳市君勝知識產權代理事務所(普通合伙) 44268
• 代理人: 王永文

本發明公開了一種菌絲霉素單克隆抗體及檢測試劑盒，所述抗體通過菌絲霉素單克隆抗體雜交瘤5D11分泌，所述雜交瘤5D11保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏日為2018年5月30日，保藏編號為CGMCC No.15790，所述試劑盒包括所述菌絲霉素抗原包被的96孔板，菌絲霉素單克隆抗體，菌絲霉素標準品，辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠IgG，樣品稀釋液，樣品洗滌液，TMB顯色液和終止液；所述雜交瘤分泌的菌絲霉素單克隆抗體特異性強，效價高，所述試劑盒可對各種樣品進行菌絲霉素的微量檢測，并且具有操作簡便、靈敏度高、重復性好等優點。

技術領域

本發明涉及免疫學技術領域，特別涉及一種菌絲霉素單克隆抗體及檢測試劑盒。

背景技術

菌絲霉素(Plectasin)是從腐生子囊菌假黑盤菌(Pseudoplectania nigrella)中分離得到的首例真菌防御素，與無脊椎動物的防御素存在50％-55％同源性，與哺乳動物的α-或β-防御素沒有序列相似性。成熟的菌絲霉素由40個氨基酸殘基組成，由一個α-螺旋和兩個反平行的β-折疊組成，包含三個二硫鍵形成的穩定的空間結構。菌絲霉素對革蘭氏陰性細菌的抑菌作用較弱，但對革蘭氏陽性細菌具有明顯殺傷作用，包括：鏈球菌屬、葡萄球菌屬、腸球菌屬、棒狀桿菌屬和桿狀菌屬，尤其值得注意的是，菌絲霉素對耐藥金葡(MRSA)具有非常顯著的殺菌作用，而且菌絲霉素對肺炎鏈球菌的MIC和MBC與萬古霉素和青霉素的相當。同時，菌絲霉素對寄生蟲Neurospora crassa也有一定的抑菌作用，但對人和兔的紅細胞沒有溶血性，對人的支氣管上皮細胞和肺成纖維細胞沒有毒性，也不會誘導白介素IL-8在A549細胞中的轉錄和翻譯。

菌絲霉素作為一種頗具吸引力的新型抗菌藥物，目前正吸引了眾多研究者進行全方位的研究，包括臨床應用(藥代動力學、藥效動力學、動物模型等)、基因分子改造、基因工程表達、分離純化、替抗應用等。可靠的菌絲霉素定量檢測方法是開展這些工作的基礎，目前，菌絲霉素的定量檢測方法主要是HPLC法(高效液相色譜法)，但是該方法靈敏度不高、特異性不強、干擾因素太多，適合于高濃度、高純度菌絲霉素樣品的定量檢測，比如發酵液中菌絲霉素含量檢測。但是藥代/藥效動力學實驗、動物模型實驗、環境中殘留檢測等實驗要求的是菌絲霉素的微量檢測，顯然，HPLC法是無法滿足需要的。

可見，現有技術還有待改進和提高。

發明內容

鑒于上述現有技術的不足之處，本發明的目的在于提供一種菌絲霉素單克隆抗體及檢測試劑盒，旨在解決現有技術的檢測方法無法滿足菌絲霉素樣品的微量檢測的問題。

為了達到上述目的，本發明采取了以下技術方案：

一種菌絲霉素單克隆抗體，通過菌絲霉素單克隆抗體雜交瘤5D11分泌，所述雜交瘤5D11保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏日為2018年5月30日，保藏編號為CGMCC No.15790。

所述菌絲霉素單克隆抗體雜交瘤5D11的制備方法，包括：通過中國發明申請號201710939331.5中所述的菌株發酵、HPLC分離純化、透析、凍干，獲得菌絲霉素抗原；選4只SPF級BALB/c小鼠，菌絲霉素抗原與弗氏完全佐劑混合乳化，免疫1次，菌絲霉素抗原與弗氏不完全佐劑混合乳化，免疫3次；選血清效價最佳的免疫小鼠脾細胞與對數生長期的小鼠骨髓瘤細胞SP2/0用50％PEG4000融合，再用RPMI1640培養基終止反應，離心棄去上清，然后用正常BALB/c小鼠腹腔巨噬細胞的HAT培養基重懸融合細胞，間接ELISA法篩選，多次有限稀釋，得到穩定分泌菌絲霉素單克隆抗體雜交瘤5D11。

一種菌絲霉素檢測試劑盒，由所述的菌絲霉素單克隆抗體雜交瘤分泌的菌絲霉素抗體制備。

所述菌絲霉素檢測試劑盒中，所述試劑盒通過間接競爭ELISA法檢測菌絲霉素的含量，靈敏度高。