[發明專利]蘋果酸在5-甲基及5-羥甲基胞嘧啶核苷分析中的應用

有效

• 申請號: 201810631618.6
• 申請日: 2018-06-19
• 公開（公告）號: CN108982726B
• 公開（公告）日: 2020-10-02
• 發明（設計）人: 郭成;丁培麗;鄭樹
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: G01N30/34
• 分類號: G01N30/34
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 趙杭麗

1.蘋果酸在5-甲基及5-羥甲基胞嘧啶核苷分析中的應用，其特征在于：在用于5-甲基及5-羥甲基胞嘧啶核苷液相色譜串聯質譜分析的流動相中添加蘋果酸，蘋果酸的添加濃度為0.02-0.10 mM；所述的液相色譜中的流動相是由水相和有機相組成，且水相和有機相中均含有甲酸與甲酸銨，所述的水相由10 mM甲酸銨、0.2%甲酸及水組成；所述的有機相由0.02-0.10mM蘋果酸、2 mM甲酸銨、0.2%甲酸及乙腈組成，并采用94%有機相、6%水相進行等度洗脫。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的液相色譜串聯質譜分析，含有以下的步驟：

（1）配制工作溶液，所述工作溶液由標準溶液和內標溶液配置而成；

（2）采用所述添加蘋果酸的流動相對步驟（1）所述的工作溶液進行液相色譜串聯質譜分析，繪制內標法標準曲線，所述蘋果酸的添加濃度為0.06 mM；

（3）采用與步驟（2）相同的流動相，對待測的5-甲基及5-羥甲基胞嘧啶核苷樣品進行液相色譜串聯質譜分析；

（4）根據已建立的內標法標準曲線計算樣品中的5-甲基及5-羥甲基胞嘧啶核苷濃度；

所述液相色譜的分離方式為親水相互作用，所述質譜的檢測方式為多反應監測。

3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述的標準溶液的配制方法如下：

準確以水為溶劑配制濃度均為1 mM的5-甲基-2’-脫氧胞苷、5-羥甲基-2’-脫氧胞苷、5-甲基胞苷和5-羥甲基胞苷儲備液，各取1 ml四種核苷溶液加入6 ml水配成濃度均為0.1mM的混合儲備液，加入水稀釋至1 μM，再根據需要稀釋成0.1-100 nM不同濃度的標準溶液。

4.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述內標溶液的配制方法如下：準確用水配制含有四種同位素核苷內標物的內標儲備液, [D₃] 5-甲基-2’-脫氧胞苷、 [D₃]5-羥甲基-2’-脫氧胞苷、[¹³C₅]5-甲基胞苷和[¹³CD₂]5-羥甲基胞苷的濃度均為1 mM，使用時稀釋成所需要的內標溶液。