[發明專利]一種疏水性多肽的純化方法

在審

• 申請號: 201810631333.2
• 申請日: 2018-06-19
• 公開（公告）號: CN108864249A
• 公開（公告）日: 2018-11-23
• 發明（設計）人: 徐紅巖;賀秀慧;楊明
• 申請（專利權）人: 南京肽業生物科技有限公司
• 主分類號: C07K1/20
• 分類號: C07K1/20
• 代理公司: 南京眾聯專利代理有限公司 32206
• 代理人: 顧進

本發明屬于生物分子分離純化技術領域，特別涉及一種疏水性多肽的純化方法，包括以下步驟：步驟1，將疏水性多肽粗品溶解于N,N?二甲基甲酰胺，配置成4?40mg/L的多肽溶液；步驟2，將步驟1制成的多肽溶液進行高效液相色譜分離純化；所述高效液相色譜的分離純化條件為：色譜柱：C18；流動相：溶液A：三氟醋酸?乙腈溶液，三氟醋酸與乙腈的質量比為1?2:100；溶液B：三氟醋酸?水溶液，三氟醋酸與水的質量比為1?2:100；流速：1?2ml/min；本發明可以對疏水性多肽進行純化，純化方法簡單，高效，經本方法得到的疏水性多肽純度高，且在純化過程中原料損失少，節約成本，綠色環保。

技術領域

本發明屬于生物分子分離純化技術領域，特別涉及一種疏水性多肽的純化方法。

背景技術

多肽是α-氨基酸以肽鍵連接在一起而形成的化合物，它也是蛋白質水解的中間產物。由兩個氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫做二肽，同理類推還有三肽、四肽、五肽等。通常由三個或三個以上氨基酸分子脫水縮合而成的化合物都可以成為叫多肽。

疏水性多肽指的是富含疏水性氨基酸的多肽。疏水性氨基酸為側鏈具有高疏水性的氨基酸之總稱氨基酸側鏈的疏水性，是從各氨基酸的疏水性減去甘氨酸疏水性之值來表示。疏水性氨基酸有酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、丙氨酸和蛋氨酸(甲硫氨酸)。疏水性氨基酸在蛋白質內部，由于其疏水的相互作用，而在保持蛋白質的三級結構上起作用。另外在酶和基質、抗體和抗原間的相互作用等各種非共價鍵的分子結合方面，具有重要作用，例如在抗體的與抗原結合的部位上有很多疏水性氨基酸，它參與與半抗原的結合。在維持生物膜的結構方面，疏水性氨基酸也具有作用，例如在紅血球膜上存在的血型糖蛋白其膜內部分有許多疏水性氨基酸，形成一個疏水的區域。

在多肽的合成和切割中會產生不完全肽、反應副產物、殘留試劑等，有必要對多肽進行純化。

發明內容

本發明解決現有技術中存在的上述技術問題，提供一種疏水性多肽的純化方法。

為解決上述問題，本發明的技術方案如下：

一種疏水性多肽的純化方法，包括以下步驟：

步驟1，將疏水性多肽粗品溶解于N,N-二甲基甲酰胺，配置成4-40mg/L的多肽溶液；

步驟2，將步驟1制成的多肽溶液進行高效液相色譜分離純化；

所述高效液相色譜的分離純化條件為：

色譜柱：C18；

流動相：溶液A：三氟醋酸-乙腈溶液，三氟醋酸與乙腈的質量比為1-2:100；

溶液B：三氟醋酸-水溶液，三氟醋酸與水的質量比為1-2:100；

流速：1-2ml/min；

檢測波長：220nm。

優選地，所述色譜柱的型號為：Diamonsil C18，4.6*250mm，5um。

優選地，所述流動相中溶液A的配比為：三氟醋酸與乙腈的質量比為1:100。

優選地，所述流動相中溶液B的配比為：三氟醋酸與水的質量比為1:100。

優選地，所述流速為2ml/min。

優選地，所述疏水性多肽是包含甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸中任意一種或幾種以上的氨基酸的多肽。

優選地，所述粗品疏水性多肽的純度為87-89％。

相對于現有技術，本發明的優點如下，