[發明專利]一種基于黑猩猩腺病毒68型和MERS-CoV全長膜蛋白的新型冠狀病毒疫苗

有效

• 申請號: 201810628239.1
• 申請日: 2018-06-19
• 公開（公告）號: CN110616198B
• 公開（公告）日: 2021-02-19
• 發明（設計）人: 張林琦;周東明;賈雯旭;張超;史宣玲
• 申請（專利權）人: 清華大學;中國科學院上海巴斯德研究所
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/861;C12N15/50;C07K14/165;A61K39/215;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;何葉喧

本發明公開了一種基于黑猩猩腺病毒68型和MERS?CoV全長膜蛋白的新型冠狀病毒疫苗。本發明保護一種重組腺病毒，是重組質粒轉染腺病毒包裝細胞，然后進行細胞培養得到的；所述重組質粒是將特異DNA分子插入黑猩猩腺病毒載體AdC68的△E1區域得到的；所述特異DNA分子中具有全長MERS?CoV Spike蛋白的編碼基因；所述腺病毒包裝細胞中具有腺病毒E1基因。本發明還保護表達全長MERS?CoV Spike蛋白的重組腺病毒；所述重組腺病毒的出發毒株為黑猩猩腺病毒68型或非復制型黑猩猩腺病毒68型。本發明研發的針對新型冠狀病毒MERS?CoV的疫苗具有重要的理論指導價值和廣泛的應用前景，為中東呼吸綜合征的根治提供了可能性。

技術領域

本發明涉及一種基于黑猩猩腺病毒68型和MERS-CoV全長膜蛋白的新型冠狀病毒疫苗。

背景技術

新型冠狀病毒(MERS-CoV)于2012年首次在中東地區被發現感染人類，隨后這種病毒感染疾病又先后出現在歐洲幾個國家和地區。多數MERS-CoV感染病人均會出現嚴重的呼吸道疾病，其臨床癥狀同2003年爆發的由SARS-CoV引起的疾病非常相似。由于這種疾病可以人傳染給人，因此引起了全世界的高度關注。到目前為止，還沒有特異性的藥物和疫苗對這種疾病進行治療和預防。

MERS-CoV利用其表面的膜蛋白S(又稱S蛋白)進入易感細胞。S蛋白由如下三個結構域組成：位于N端的S1結構域、位于近膜端的S2結構域、跨膜結構域。MERS-CoV對宿主細胞的易感性是由S1結構域決定的。

發明內容

本發明的目的是提供一種基于黑猩猩腺病毒68型和MERS-CoV全長膜蛋白的新型冠狀病毒疫苗。

本發明保護一種重組腺病毒，是重組質粒轉染腺病毒包裝細胞，然后進行細胞培養得到的；所述重組質粒是將特異DNA分子插入黑猩猩腺病毒載體AdC68的△E1區域得到的；所述特異DNA分子中具有全長MERS-CoV Spike蛋白的編碼基因；所述腺病毒包裝細胞中具有腺病毒E1基因。

所述細胞培養可為單次細胞培養。

所述細胞培養可為多次連續細胞培養。

所述細胞培養為多次連續細胞培養時，第一次細胞培養為將重組質粒轉染腺病毒包裝細胞，然后進行培養。所述細胞培養為多次連續細胞培養時，從第二次細胞培養開始，每次細胞培養的步驟均為：將上一代細胞培養完成后收集細胞并破碎后收集的上清液感染新的腺病毒包裝細胞，然后進行培養。所述細胞培養為多次連續細胞培養時，最后一次細胞培養后，收集細胞并破碎，然后收集的上清液，進行病毒純化，得到病毒液。

所述重組腺病毒的制備方法，依次包括如下步驟：

(1)將線性化的重組質粒轉染腺病毒包裝細胞，然后培養至80％左右的細胞可以觀察到噬斑形成；

(2)收集細胞，采用反復凍融的方式進行細胞破碎，然后離心收集上清液。

所述重組腺病毒的制備方法，依次包括如下步驟：

(1)將線性化的重組質粒轉染腺病毒包裝細胞，然后培養至80％左右的細胞可以觀察到噬斑形成；

(2)收集細胞，采用反復凍融的方式進行細胞破碎，然后離心收集上清液；

(3)將上清液感染腺病毒包裝細胞，培養至絕大多數細胞為漂浮狀態；

(4)收集細胞，采用反復凍融的方式進行細胞破碎，然后離心收集上清液；

(5)將上清液感染腺病毒包裝細胞，培養至絕大多數細胞為漂浮狀態；

(6)收集細胞，采用反復凍融的方式進行細胞破碎，然后離心收集上清液；

(7)將上清液感染腺病毒包裝細胞，培養至絕大多數細胞為漂浮狀態；