[發明專利]用于獼猴桃金玉品種鑒定的分子標記引物及應用

有效

• 申請號: 201810627309.1
• 申請日: 2018-06-19
• 公開（公告）號: CN108796115B
• 公開（公告）日: 2021-06-11
• 發明（設計）人: 鐘彩虹;張瓊;黃宏文;韓飛
• 申請（專利權）人: 中國科學院武漢植物園
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 龔瑩瑩

本發明屬于分子生物學及遺傳育種技術領域，更具體涉及用于獼猴桃金玉品種鑒定的分子標記引物及應用，所述的引物為：Geo1?117?F:GGGATCAACAGCACCAGAGT和Geo1?117?R:TGTCAGTTTGAAGCCGATCAT。利用本發明提供的引物對金玉DNA進行擴增，僅金玉可特異性的擴增出250bp的條帶；根據不同條帶的大小和數目，本發明提供的引物也可對：‘布魯諾’、‘川獼3號’‘翠玉’、‘東紅’、‘貴長’、‘YX?H8’、‘海沃德’、‘金魁’、‘金農’、‘金霞’、‘金艷’、‘金圓’、‘MBR’、‘米良1號’、‘通山5號’、‘湘麻6號’、‘豫皇一號’或‘江山嬌’獼猴桃品種進行區分。

技術領域

本發明屬于分子生物學及遺傳育種技術領域，更具體涉及用于獼猴桃‘金玉’品種鑒定的分子標記引物及應用。

背景技術

中國是獼猴桃屬植物的原產地和獼猴桃遺傳資源的原始起源中心。近年來，我國獼猴桃產業穩步擴增，截至2017年全國栽培面積達240萬畝，產量290萬噸，均居世界首位。在品種格局上，我國立足于本土獼猴桃遺傳資源研究，選育出了一系列獼猴桃新品種，在全球范圍廣泛栽培，徹底改變了世界獼猴桃產業唯‘海沃德’品種的單一格局，推動了獼猴桃市場多樣化和消費的多元化。

隨著獼猴桃新品種的日益推出，新品種的鑒定是亟待解決的一大難題。目前，對獼猴桃專利品種的鑒定僅通過樹勢、葉片形態、花期、花形態、果實外觀等傳統手段，難免受到環境和其他人為因素的影響。對獼猴桃品種的不確定性，限制了產業的健康持續發展，且苗木品種不純甚至錯誤將造成果農經濟效益嚴重受損。

分子標記技術能快速、準確、高效對品種進行鑒定,對保證農業生產中品種的正確性具有重要的意義。選擇適宜的分子標記及其配套檢測技術,建立一套簡便、經濟、準確而高效的品種鑒定和指紋圖譜技術體系,是打擊假冒偽劣種苗、保護植物遺傳育種工作者和農民的合法權益，規范我國農業市場的迫切需要。

分子標記技術通過檢測生物個體在基因組上產生的變異，從而對不同個體進行區分，是繼形態標記和生化標記之后，發展的一種較為理想的遺傳標記。在植物種質資源鑒定及育種中，對分子標記的應用已日趨成熟。SSR分子標記數量豐富且隨機均勻分布于基因組，呈共顯性，等位變異高，操作簡便且穩定性好，已應用于大豆、蘋果和葡萄等品種鑒定方面。在獼猴桃中，分子標記技術應用于獼猴桃雄性系列品種的鑒定，已為多個優異獼猴桃品種準確提供授粉雄株，提升獼猴桃的育種效率。

‘金玉’果實短圓柱形，果肉金黃色，風味甜或濃甜，有清香，口感好。軟熟果實含可溶性固形物21％，干物質22％，總糖14％，總酸1.3％，維生素C含量為118毫克/100克。果實極耐貯藏，貨架期10天以上。開發適用于獼猴桃‘金玉’品種的分子鑒定標記，有利于從分子水平上明確界定專利品種，利于對獼猴桃品種進行鑒定和品種保護。

發明內容

本發明的目的在于利用分子標記技術，提供一種用于獼猴桃‘金玉’品種鑒定的分子標記引物，所述的分子標記命名為Geo1-117，針對其設計的引物為Geo1-117-F:GGGATCAACAGCACCAGAGT和Geo1-117-R:TGTCAGTTTGAAGCCGATCAT。

本發明的另一個目的在于提供了用于獼猴桃‘金玉’品種鑒定的分子標記引物在獼猴桃育種中的應用。

為了達到上述目的，本發明采取以下技術措施：

用于獼猴桃‘金玉’品種鑒定的分子標記引物的獲得：申請人從獼猴桃基因組序列網站(http://bioinfo.bti.cornell.edu/kiwi)下載‘紅陽’獼猴桃全基因序列。通過SSRFinder軟件在全基因組范圍內開發SSR標記，根據基因結構注釋結果，選擇基因位點設計SSR標記引物。利用設計合成的引物，對獼猴桃‘金玉’品種進行PCR擴增，篩選得到分子標記Geo1-117，針對其設計的引物為Geo1-117-F:GGGATCAACAGCACCAGAGT和Geo1-117-R:TGTCAGTTTGAAGCCGATCAT。