[發明專利]一種抗腫瘤多肽及其單克隆抗體和ELISA試劑盒

在審

• 申請號: 201810624966.0
• 申請日: 2018-06-17
• 公開（公告）號: CN108752432A
• 公開（公告）日: 2018-11-06
• 發明（設計）人: 崔香菊;李興國
• 申請（專利權）人: 崔香菊
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;A61K38/16;A61P35/00;C07K16/18;G01N33/68;G01N33/577;G01N33/574
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• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種抗腫瘤多肽，為計算機輔助設計并且人工合成的由81個氨基酸組成的多肽，在抗腫瘤多肽優化過程中，不僅采用了氨基酸選擇性替換和增刪的常規多肽設計策略，還將氨基酸側鏈改構策略融合到設計理念中，在更大程度上得到理想的多肽結構。本發明抗腫瘤多肽肽鏈長度短，采用常規的Fmoc法固相合成即可得到，為PD?1抑制劑，對腫瘤具有較好的抑制活性。在抗腫瘤多肽的基礎上進一步地得到單克隆抗體和ELISA試劑盒，在藥物開發過程中用于檢測血液中抗腫瘤多肽的含量。

技術領域

本發明屬于多肽設計與固相合成、抗體制備與檢測和藥理活性研究領域，具體涉及一種抗腫瘤多肽及其單克隆抗體和ELISA試劑盒。

技術背景

惡性腫瘤是一種嚴重損害人類健康的疾病，我國腫瘤造成的死亡占全部死亡的四分之一。據統計，2011年全國每10萬人中就有250人患惡性腫瘤。近幾十年，我國惡性腫瘤的發病率每年都有提高，發病率的上升趨勢趨向于直線。據估計，在2049年我國每10萬人中將有400人患癌癥。目前腫瘤的治療手段在很大程度上仍是以藥物治療為主。因而，研究以及開發新型的高效、低毒抗腫瘤藥物具有非常重要的意義。其中，氨基酸導向的小肽化合物具有非常好的抗腫瘤活性。除此之外，氨基酸載體具備非常好的生物親和性和生物相容性。在一些抗腫瘤藥物分子中，引入氨基酸，能夠提高藥物的選擇性和生物相容性，并且能降低其對正常細胞的毒性。另一方面，肽類是全能型的生物活性分子之一，假肽和偽肽類化合物以及其衍生物的生物活性非常多，例如抗菌，抗病毒和抗癌等活性。

機體T細胞免疫在控制腫瘤的發生、發展過程中起到了重要作用。其中腫瘤局部浸潤性CD8+T淋巴細胞在機體抗腫瘤免疫應答中發揮了關鍵作用。近年來發現，腫瘤患者體內存在免疫抑制機制，妨礙機體對腫瘤的清除，導致腫瘤長期定植，表現為T淋巴細胞功能障礙與增殖能力減弱。PD-1已被公認為是衰竭性T淋巴細胞的表面標志。阻斷PD-1/PD-L1通路可以部分恢復衰竭性T細胞的功能。已知PD-1(programmed death 1)程序性死亡受體1，是一種重要的免疫抑制分子。以PD-1為靶點的免疫調節對抗腫瘤、抗感染、抗自身免疫性疾病及器官移植存活等均有重要的意義。其配體PD-L1也可作為靶點，相應的抗體也可以起到相同的作用。

根據蛋白的空間結構設計多肽，從而在三維結構上抑制蛋白的功能是目前研究的熱點，并且也有多個產品已經上市。基于PD-1抗體研究的高投入和不確定性，針對PD-1的特異性多肽的研究也是一個新的研究方向。

假肽（pseudo-peptide）與肽的差別僅在肽段中部分片段的改變。假肽的獲取和結構確證方法與一般肽的合成方法相似，僅在于原料氨基酸的改變。假肽具有耐受酶解、穩定性好、生物利用度高等優點，假肽研究作為多肽類藥物結構優化的重要手段已成為藥物研發中非常活躍的領域。

發明內容

本發明提供一種抗腫瘤多肽，為計算機輔助設計并且人工合成的由81個氨基酸組成的多肽，所述計算機輔助設計的軟件為申請人團隊自主開發，工作原理為：具有一定長度的隨機短肽使其在PD-1蛋白分子表面游走，計算該短肽上各個原子和PD-1蛋白表面相鄰原子的作用力，以及移動、扭轉肽段產生的能量變化，反復優化比較各種可能的結合方式，選擇能量最低的，做為定構象。在抗腫瘤多肽優化過程中，不僅采用了氨基酸選擇性替換和增刪的常規多肽設計策略，還將氨基酸側鏈改構策略融合到設計理念中，在更大程度上得到理想的多肽結構。本發明抗腫瘤多肽肽鏈長度短，采用常規的Fmoc法固相合成即可得到，而且對腫瘤具有較好的抑制活性。

本發明一方面公開一種抗腫瘤多肽，其序列如SEQ ID NO：1所示。

本發明另一方面公開一種抗腫瘤多肽，通過序列如SEQ ID NO：1所示的多肽鏈中的少數氨基酸側鏈結構改造設計而成，序列中第17位的氨基酸Tyr、第46位的氨基酸Phe、第77位的氨基酸Tyr至少有一個替換為（本專利中簡稱Paa，CAS：161088-71-7）。Baa在肽鏈中與前后氨基酸的羥基和氨基縮合成為肽鍵的形式存在。