[發明專利]一種高效液相色譜法同時檢測尼奧靈、宋果靈和附子靈的方法

有效

• 申請號: 201810620129.0
• 申請日: 2018-06-15
• 公開（公告）號: CN108445115B
• 公開（公告）日: 2021-01-01
• 發明（設計）人: 易進海;羅春梅;易凡力;黃志芳;湯依娜;劉云華;劉玉紅;陳燕
• 申請（專利權）人: 四川省中醫藥科學院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 四川省成都市天策商標專利事務所 51213
• 代理人: 龔海月

本發明公開了一種高效液相色譜法檢測尼奧靈和/或宋果靈和/或附子靈的方法。以尼奧靈和/或宋果靈和/或附子靈溶液為對照品，再以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相和含三乙胺水溶液的流動相為色譜條件下檢測，其中的流動相是體積比為(10?80):(90?20)的乙腈?三乙胺水溶液等度或梯度洗脫，蒸發光散射檢測器檢測，所述的三乙胺水溶液濃度為0.02～0.2％。該方法分離效果佳，簡便快捷，重復性好，為含尼奧靈和/或宋果靈和/或附子靈的附子(附片)或川烏及其提取物、中成藥的質量控制提供了高效的檢測方法。

技術領域

本發明涉及高效液相色譜分析技術，更具體地，本發明涉及一種高效液相色譜法同時檢測尼奧靈、宋果靈和附子靈的方法。

背景技術

附子為毛茛科植物烏頭Aconitum carmichaelii Debx.子根的加工品，具有回陽救逆、補火助陽、散寒止痛等功效，附子的炮制飲片有生附片、蒸附片、炒附片等。川烏為毛茛科植物烏頭Aconitum carmichaelii Debx.的干燥母根，具有祛風除濕，溫經止痛作用，川烏的炮制飲片有生川烏、制川烏。附子和川烏的主要活性成分為二萜生物堿，根據C4位與C8位有無酯基，可分為雙酯型生物堿(烏頭堿、新烏頭堿、次烏頭堿)、單酯型生物堿(苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿)和胺醇型生物堿(尼奧靈、宋果靈、附子靈等)。現行版中國藥典采用高效液相色譜法(HPLC)，紫外檢測器(UV)檢測，測定單酯型生物堿和/或雙酯型生物堿含量作為附子、川烏及其飲片的質量控制指標。近年來，研究表明胺醇型二萜生物堿具有強心等多種活性作用，如尼奧靈具有強心、鎮痛作用，附子靈具有強心、抗休克、改善心肌缺血等作用，宋果靈具有抗炎鎮痛、抗焦慮等作用。

如上所述，一般采用HPLC-UV法測定酯型生物堿含量作為附子、川烏及其加工品(飲片、中成藥、提取物)的質量評價指標，鮮見測定胺醇型二萜生物堿的含量，因此，缺乏質量控制的整體性和科學性。在胺醇型生物堿含量測定方面，有文獻報道采用UPLC-MS/MS法同時測定多種附子胺醇型生物堿成分的含量和采用HPLC-UV法測定宋果靈的含量，但前者設備條件要求高、普適性差，后者胺醇型生物堿紫外吸收弱，靈敏度差、干擾大。

發明內容

本發明克服了現有技術的不足，提供一種高效液相色譜法同時檢測尼奧靈、宋果靈和附子靈的方法，以期望可以解決現有的測量方法無法準確測量胺醇型生物堿含量的問題以及現有測量方法普適性差的問題。

為解決上述的技術問題，本發明采用以下技術方案：

本申請發明人通過深入的實驗和研究，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，以乙腈-含三乙胺水溶液為流動相，蒸發光散射檢測器檢測，可為含尼奧靈和/或宋果靈和/或附子靈的附子(附片)或川烏及其提取物、中成藥的質量控制提供簡便可行的檢測方法。即本發明高效液相色譜法檢測尼奧靈和/或宋果靈和/或附子靈的方法為：采用尼奧靈和/或宋果靈和/或附子靈的對照品配制對照品溶液，在以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相、以乙腈-三乙胺水溶液為流動相的色譜條件下，對含尼奧靈、宋果靈和附子靈的被檢品溶液中的尼奧靈、宋果靈和附子靈的含量進行檢測，所述流動相是體積比為(10-80):(90-20)的乙腈-三乙胺水溶液，等度洗脫或梯度洗脫，利用蒸發光散射檢測器進行檢測，所述三乙胺水溶液中三乙胺的體積濃度為0.02-0.2％。

優選的，所述的高效液相色譜法檢測尼奧靈、宋果靈和附子靈的方法中，三乙胺水溶液中三乙胺的體積濃度為0.1％。

試驗顯示，所述的高效液相色譜法檢測尼奧靈、宋果靈和附子靈的方法可以使用不同品牌、粒徑、長度的色譜柱，采用等度洗脫時，所述流動相可以是體積比為25:75或35:65或45:55的乙腈-三乙胺水溶液，其中，三乙胺水溶液中三乙胺的體積濃度優選為0.1％。

所述的高效液相色譜法檢測尼奧靈、宋果靈和附子靈的方法可以采用多種不同的洗脫程序，其中兩種優選的洗脫程序為：