[發明專利]一種大鱗副泥鰍微衛星家系鑒定方法及其應用

有效

• 申請號: 201810619814.1
• 申請日: 2018-06-15
• 公開（公告）號: CN108841930B
• 公開（公告）日: 2021-09-28
• 發明（設計）人: 白曉慧;羅璋;楊華;孟一耕;王娜;劉克明;劉義;馬林
• 申請（專利權）人: 天津市水產研究所
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858;C12Q1/6806
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 趙瑤瑤

1.一種大鱗副泥鰍微衛星家系鑒定方法，其特征在于：包括以下步驟：

⑴選擇體質健壯發育良好的大鱗副泥鰍作為親本進行全同胞家系繁殖，剪取每個親本的尾鰭組織放于離心管內，用無水乙醇固定，并記錄家系編號，于-20℃保存備用；

⑵親本和子代基因組DNA的提取；

⑶多態性微衛星標記的篩選和引物合成：選取12對微衛星引物，按照片段大小分為四組，第一組Pdab15、Pda62、Pda125，第二組Pda81、Pd226、Pd684，第三組Pda202、Pd221、Pda242，第四組Pd86、Pd451，Pd825，在正向引物5’端分別用FAM藍色、ROX紅色、HEX綠色3種不同的熒光基團進行修飾；

⑷采用熒光PCR反應對親本及子代DNA樣品進行擴增，擴增產物按照步驟⑶中的微衛星引物的分組方法進行混合，作為上機檢測的樣品，樣品在ABI 3730XL 基因分析儀上進行分型，用GS-500 LIZ作為內參，用GeneMapper 3.5軟件讀取個體的基因型；

⑸采用CERVUS 3.0軟件對親本和子代基因型進行分析，判定子代個體的父母本，

所述步驟⑶所述的12對微衛星引物的核苷酸序列如下所示：

Pdab15 F:GAATGTTTCACGGTTCTTGT R:CATTAGTGAGGACACAATGT

熒光標記為：HEX

Pda62 F:CACAGCGGCCTGAAACATC R:GAGTCTCCGAAGCCGGAAG

熒光標記為：ROX

Pda125 F:ACATTACCTGGTGCCTCTGG R:TCTAGCTTTACTGTGGGCCG

熒光標記為：FAM

Pda81 F:TTAGAGCGTGGTTAGGGCG R:TGATTCCTGGGCTGTCACG

熒光標記為：ROX

Pd226 F:CCTGCCCTGTCGCTATACAG R:CAGGACGGGCCAAAAACAAG

熒光標記為：FAM

Pd684 F:CTTTGTGGCGTTGCATCCAA R:TGTTCTGCCACTCACGACAA

熒光標記為：HEX

Pda202 F:CGACACGGGTGAAGTACAATC R:TCTCAACGAAACGGCCTTC

熒光標記為：ROX

Pd221 F:ACACCAGTTATGATACTTCATGGT R:TTGTAAGATTTTGTCTCCAATGGTT

熒光標記為：HEX

Pda242 F:TGCCAGCAATTGACATAAAGGG R:GATTTCTCAAGCCCAGCGG

熒光標記為：FAM

Pd86 F:GGAACGCACTTATCCAACGC R:CCGCCCCCATGTAATGATGT

熒光標記為：HEX

Pd451 F:GATTTGACGCAGGGCTGAAG R:TTGGTGAACAATCCCCTCCC

熒光標記為：ROX

Pd825 F:AGGTGATGTGAGAGTGTTGGAC R:GGAGAACGTGGCAGAGGTTT

熒光標記為：FAM。