[發(fā)明專利]一種白介素-6的定量檢測(cè)方法及檢測(cè)試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810619212.6
• 申請(qǐng)日: 2018-06-15
• 公開（公告）號(hào): CN108519487A
• 公開（公告）日: 2018-09-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 程云龍;于林;李雙法;李奎;董亞玲;劉功成;付光宇;吳學(xué)煒;苗擁軍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 鄭州安圖生物工程股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68
• 代理公司: 鄭州異開專利事務(wù)所(普通合伙) 41114
• 代理人: 王霞

1.一種白介素-6的定量檢測(cè)方法，其特征在于：包括下述步驟：

第一步，取抗體偶聯(lián)超順磁微粒、生物素化抗體與待測(cè)樣本發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)，得到第一反應(yīng)物；其中所述抗體偶聯(lián)超順磁微粒為超順磁微粒與抗IL-6單克隆抗體B偶聯(lián)得到的產(chǎn)物，生物素化抗體為生物素N羥基丁二酰亞胺酯與抗IL-6單克隆抗體A偶聯(lián)得到的產(chǎn)物；

第二步，取親和素與第一反應(yīng)物發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)，得到第二反應(yīng)物；其中所述的親和素為鏈霉親和素蛋白；

第三步，取生物素化酶與第二反應(yīng)物發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)，得到第三反應(yīng)物；其中生物素化酶為生物素N羥基丁二酰亞胺酯與酶偶聯(lián)得到的產(chǎn)物；

第四步，取化學(xué)發(fā)光底物與第三反應(yīng)物發(fā)生酶促反應(yīng)，測(cè)定發(fā)光信號(hào)，獲得白介素-6的濃度值。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白介素-6的定量檢測(cè)方法，其特征在于：所述第一步、第二步、第三步中發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)的溫度為37℃，反應(yīng)時(shí)間為3~15min；第四步酶促反應(yīng)的溫度為37℃，反應(yīng)時(shí)間為5~15min。

3.一種定量檢測(cè)血液中白介素-6的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括生物素化抗體、生物素化酶、親和素、化學(xué)發(fā)光底物和抗體偶聯(lián)超順磁微粒；其中：

所述生物素化抗體為生物素N羥基丁二酰亞胺酯與抗IL-6單克隆抗體A偶聯(lián)得到的產(chǎn)物；

所述生物素化酶為生物素N羥基丁二酰亞胺酯與酶偶聯(lián)得到的產(chǎn)物；

所述抗體偶聯(lián)超順磁微粒為超順磁微粒與抗IL-6單克隆抗體B偶聯(lián)得到的產(chǎn)物。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的定量檢測(cè)血液中白介素-6的試劑盒，其特征在于：所述超順磁微粒表面的活性基團(tuán)為羧基、氨基或苯甲磺酰基。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的定量檢測(cè)血液中白介素-6的試劑盒，其特征在于：所述親和素為鏈霉親和素蛋白，其反應(yīng)濃度為1~5mg/ml。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的定量檢測(cè)血液中白介素-6的試劑盒，其特征在于：所述酶為辣根過氧化物酶，所述化學(xué)發(fā)光底物為魯米諾或異魯米諾。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的定量檢測(cè)血液中白介素-6的試劑盒，其特征在于：所述酶為堿性磷酸酶，所述化學(xué)發(fā)光底物為3-（2-螺旋金剛烷）-4-甲氧基-（3-磷氧酰）-苯基-1，2-二氧環(huán)乙烷二鈉鹽。