[發明專利]一種用于真菌和細菌的細胞裂解液及其制備方法

在審

• 申請號: 201810618900.0
• 申請日: 2018-06-15
• 公開（公告）號: CN108841729A
• 公開（公告）日: 2018-11-20
• 發明（設計）人: 王淑一;吳鵬飛;牛林梅
• 申請（專利權）人: 合肥艾迪康臨床檢驗所有限公司
• 主分類號: C12N1/06
• 分類號: C12N1/06;C12N15/10
• 代理公司: 杭州千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 黎雙華

本發明公開了一種用于真菌和細菌的細胞裂解液，其特征在于，所述細胞裂解液由NaOH、十二烷基硫酸鈉(SDS)和蒸餾水組成，其中，NaOH濃度為4mM，SDS重量百分比含量為2％。本發明的用于真菌和細菌的細胞裂解液，成分很簡單，只含有NaOH和十二烷基硫酸鈉(SDS)，不需要額外添加氯仿等有害成分，成本低，經濟高效。

技術領域

本發明屬生物技術領域，特別涉及一種微生物檢驗領域中用于真菌和細菌細胞裂解液及其制備方法和細胞裂解方法。

背景技術

近幾年來，細菌和真菌的變異快，品種多，用普通的培養以及藥敏已經很難完全準確的鑒定出其型別。所以核酸檢測成為目前能夠精確判斷型別的可靠便利手段，核酸檢測的前提條件是提取足夠且質量可以的DNA或RNA，而對于這個要求的前提條件是細菌和真菌的細胞壁需要充分破裂，使得核酸充分釋放出來，從而有利于進一步實驗。

另一方面細菌和真菌都有一定的傳染性，所以在提取核酸時為了避免擴散，所以希望能在第一步就使細菌和真菌滅活同時使得核酸釋放，達到快速，少步驟地獲取高質量核酸。

酚－氯仿方法是提取核酸的經典方法，主要原理是利用核酸、蛋白等雜質在水相和有機相中溶解度不同而重新分配。酚-氯仿方法經典、便宜，用的都是實驗室常用試劑，提純效率和純度都很高，但缺點是費時費力，苯酚和氯仿還有一定毒性。

另外，目前市場上的DNA提取試劑盒原理是在特定溶液環境下(高鹽、低pH)使核酸吸附在固相介質(一般是硅膠膜)上，洗滌去除雜質后，再改變溶液環境使DNA溶解到純水或TE中。這些DNA提取試劑盒價格高，成分比較復雜，且步驟多，而且不能在第一步通過煮沸使細菌滅活，增加了感染的危險性。

發明內容

為了解決現有技術的上述問題，本發明提供了一種用于真菌和細菌的細胞裂解液。

一種用于真菌和細菌的細胞裂解液，其特征在于，所述細胞裂解液由NaOH、十二烷基硫酸鈉(SDS)和蒸餾水組成，其中，NaOH濃度為4mM，SDS重量百分比含量為2％。

本發明的用于真菌和細菌的細胞裂解液，成分很簡單，只含有NaOH和十二烷基硫酸鈉(SDS)，不需要額外添加氯仿等有害成分，成本低，經濟高效。經過大量的實驗篩選出當NaOH濃度為4mM、SDS重量百分比含量為2％時，更有利于細胞裂解，提取DNA的效果最佳。

本發明還提供了一種用于真菌和細菌的細胞裂解液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)配制NaOH儲備液：在100ml蒸餾水中加入1.6gNaOH，磁力攪拌完全溶解，放入無菌帶蓋玻璃瓶中，保存于室溫；

(2)配制NaOH工作液：取4mlNaOH儲備液，加入96ml蒸餾水中制成濃度為4mM的NaOH工作液；

(3)加入SDS：取2g SDS溶液直接加入100ml NaOH工作液中，磁力攪拌使其完全溶解，SDS重量百分比含量為2％；得到用于真菌和細菌的細胞裂解液。

本發明的細胞裂解液的制備方法配制過程簡單，操作方便。

本發明最后一個目的是提供一種真菌和細菌的細胞裂解方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)配制濃度為4mM的NaOH溶液：

(2)往NaOH溶液中加入SDS，使SDS的重量百分比含量為2％；獲得細胞裂解液；

(3)挑取真菌或細菌細胞加入細胞裂解液中，振蕩混勻，沸水浴10min，冷卻后，7000rpm離心5min。

本發明具有以下優點：

(1)本發明的細胞裂解液成分極其簡單，但是DNA提取效果能達到一般試劑盒的水平，使得DNA提取的成本大幅降低。