[發(fā)明專利]一種利用甜葉菊提取液從菊花中獲得甜菊糖苷RA的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810612576.1
• 申請(qǐng)日: 2018-05-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108912184A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-11-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭成淑;于璐;耿希
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C07H1/08
• 分類號(hào): C07H1/08;C07H15/256;G01N30/06
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種利用甜葉菊提取液從菊花中獲得甜菊糖苷RA的方法，將甜菊糖苷粗提取液噴施菊花植株上，按實(shí)驗(yàn)方案處理一個(gè)月后，用纖維素酶法提取菊花葉片中甜菊糖苷，用大孔樹脂吸附法純化甜菊糖苷粗提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀法蒸干菊花中甜菊糖提取液，最后利用高效液相色譜儀分析菊花葉片甜菊糖苷含量。

2.如權(quán)利1中的獲得利用纖維素酶獲得甜菊糖苷粗提取液的方法，其特征在于，采摘甜葉菊品種‘潤(rùn)農(nóng)’植株上的葉片，將葉片放入干燥箱內(nèi)干燥，干燥箱溫度設(shè)為55℃，干燥48h后備用，將干燥的甜葉菊葉片500g粉碎后，倒入80目篩中過(guò)濾，將過(guò)濾出的粉末稱取50g于燒杯中，加入230ml純凈水和5ml 2％纖維素酶，PH控制在5左右，于50℃水浴鍋中水浴90min，用布氏漏斗抽濾，離心后，取上清液過(guò)濾，取出的殘?jiān)校M(jìn)一步加入230ml純凈水和5ml 2％纖維素酶后，在水浴鍋中加熱45min，抽濾，取濾液，然后在濾液中加入5g氧化鈣和4g硫酸鋁鉀后，在50℃水浴中除雜質(zhì)40min，攪拌過(guò)濾到1L容量瓶中定容，從而獲得甜葉菊葉片中的甜菊糖苷粗提取液1L。

3.如權(quán)利1中的將甜菊糖苷粗提取液噴施菊花植株上的方法，其特征在于，將經(jīng)過(guò)上述1過(guò)程獲得的甜葉菊葉片中的甜菊糖苷粗提取液1L稀釋成10倍，當(dāng)菊花株高達(dá)到30cm時(shí)，上午9：00利用噴霧器，將稀釋液噴施菊花植株一次，每次噴施甜菊糖苷粗提取液的方法是全株噴施，而且以噴到菊花葉片上不滴水珠為度，每周噴一次，連續(xù)噴施4次，噴施4次后隔一周，在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)后的第六周上午9：00分，觀察菊花植株上無(wú)露珠時(shí)，取菊花地上部，去除有病斑的葉片，篩選出一定量的健壯、無(wú)病斑的葉片，將其放入干燥箱內(nèi)干燥。

4.如權(quán)利1中的用大孔樹脂吸附法純化甜菊糖苷粗提取液的方法，其特征在于，用大孔樹脂吸附法純化甜菊糖苷粗提取液，將經(jīng)過(guò)上述3過(guò)程提取的菊花葉片甜菊糖苷粗提液，通過(guò)裝有大孔型吸附樹脂的層析柱，此時(shí)，甜菊糖苷幾乎全部被樹脂吸附，棄去濾液，用95％的乙醇洗脫樹脂所吸附的甜菊糖苷，直至樹脂變白色，收集洗脫液，將洗脫液經(jīng)0.45μm微孔濾膜過(guò)濾。

5.如權(quán)利1中的用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀法蒸干菊花中甜菊糖提取液的方法，其特征在于，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀法蒸干菊花中甜菊糖提取液時(shí)，將經(jīng)過(guò)上述4過(guò)程所得到的濾液在45℃下的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干，菊花葉片甜菊糖苷成分被蒸干在圓底燒瓶中，用3ml的流動(dòng)相95％乙醇溶解。

6.如權(quán)利1中的利用高效液相色譜儀分析菊花葉片甜菊糖苷含量的方法，其特征在于，利用高效液相色譜儀分析菊花葉片甜菊糖苷含量時(shí)，準(zhǔn)確稱取99％RA、85％RC、98.5％STV標(biāo)準(zhǔn)品5mg，置于10mL容量瓶中，用流動(dòng)相95％乙醇溶解，并定容到5ml，搖勻后備用，精密吸取對(duì)照溶液和處理的樣品溶液各20μL，分別注入高效液相色譜儀，以外標(biāo)法計(jì)算各個(gè)甜菊糖苷成分的含量，高效液相色譜儀檢測(cè)條件設(shè)為：儀器型號(hào)，美國(guó)Waters 515型；檢測(cè)器，Waters2487雙波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器；色譜柱，Kromasil 250×4.6氨基柱；流動(dòng)相，乙腈∶水＝80∶20；波長(zhǎng)，210nm；靈敏度，0.5AUFS；流速，0.9ml/min；進(jìn)樣量，10ul，通過(guò)高效液相色譜儀分析菊花葉片甜菊糖苷含量，發(fā)現(xiàn)總甜菊糖苷含量達(dá)到0.81％，RA含量為0.50％。