[發明專利]一種新型提純砷螯合型免疫復合物方法

在審

• 申請號: 201810610896.3
• 申請日: 2018-06-14
• 公開（公告）號: CN109001448A
• 公開（公告）日: 2018-12-14
• 發明（設計）人: 張積仁;李波;王進京;楊萬泉;鐘錦永
• 申請（專利權）人: 廣東騰湃醫療股份有限公司
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務所(普通合伙) 11548
• 代理人: 李靜

本發明公開了一種新型提純砷螯合型免疫復合物方法，包括以下步驟：步驟一：先將螯合劑溶液配制完成，再將螯合劑溶于溶劑中，即可得到螯合劑溶液，步驟二：取適量載體蛋白，將載體蛋白加入到硼酸鹽緩沖溶液中，即可制得載體蛋白溶液，步驟三：將已制得的螯合劑溶液加入到載體蛋白溶液中，置于恒溫水浴中并攪拌均勻，恒溫水浴，即可得到混合液，步驟四：自制半透膜，步驟五：預提純除去未螯合的砷離子和其它雜離子，步驟六：除去未結合的載體蛋白。本發明的提純過程中部分用品自制，因此能夠顯著降低提純成本，工作環境的要求更低，適用的范圍更加廣泛，使用復式層析柱有效減少提純和純化時間，一定程度上降低了成本。

技術領域

本發明涉及一種免疫復合物領域，具體為一種新型提純砷螯合型免疫復合物方法。

背景技術

免疫復合物是抗體與抗原結合所得到的一種復合物，是由各種免疫細胞、吞噬細菌，病毒，致敏物質共同死亡后結合而形成的，所以又稱抗原-抗體復合物，在某些情況下，抗原與抗體在體內形成的免疫復合物，沉積于血管壁基底部，從而激活補體，被激活的補體，發揮溶解細菌、病毒、腫瘤細胞等作用，但是現有提純砷螯合型免疫復合物方法，提純的成本較高，提純過程中對實驗研究的環境要求高，影響使用范圍限制了使用，而提純時間較長，增加了提純和純化的時間。

發明內容

本發明的目的在于提供一種新型提純砷螯合型免疫復合物方法及其制備方法，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種新型提純砷螯合型免疫復合物方法，包括以下步驟：

步驟一：先將螯合劑溶液配制完成，再將螯合劑溶于溶劑中，即可得到螯合劑溶液；

步驟二：取適量載體蛋白，將載體蛋白加入到硼酸鹽緩沖溶液中，即可制得載體蛋白溶液；

步驟三：將已制得的螯合劑溶液加入到載體蛋白溶液中，置于恒溫水浴中并攪拌均勻，恒溫水浴，即可得到混合液；

步驟四：自制半透膜，向光滑、潔凈、干燥的250ml錐形瓶中倒入火棉膠溶液，小心轉動容器，使火棉膠溶液均勻附在壁上成一薄層，傾出多余的溶液，然后將容器倒置，進一步將多余溶液流盡和使溶劑乙醚揮發掉，直至用手指輕觸所形成的膜而不粘著方可，然后往容器中加水至滿為止，遇水后在乙醚未蒸發干的地方會發白，制成半透膜，將瓶口上的膜脫開，并在膜與容器壁間注入水，使膜自動脫離瓶壁，輕輕取出制成的袋形半透膜，檢查是否有孔洞，如果有則不能使用，應重新制作，若以膜袋浸入不同濃度的乙醇水溶液中，則可得到不同滲透度的膜，按此法制作的半透膜不使用時，則應存放于水中，以免損壞；

步驟五：預提純除去未螯合的砷離子和其它雜離子，在將3-5組半透膜按內外次序排列后加入EDTA溶液煮沸10min，棄廢液后用ddH₂O沖洗，重復該步驟2-4次，步驟三中的混合液裝入處理后的多層半透膜中，用ddH₂O透析換水，4℃透析過夜之后，收集液體；

步驟六：除去未結合的載體蛋白，取未使用的復式層析柱，用稀釋緩沖液沖洗層析柱的管路，在上層層析柱中裝入能與砷離子特異性結合的填料，在下層層析柱中裝入能與載體蛋白特異性結合的填料，裝柱后，繼續使用稀釋緩沖液K₂HPO₄平衡層析柱，待層析柱平衡后，用稀釋緩沖液K₂HPO₄稀釋步驟四中的樣品，然后上柱，載體蛋白與填料特異性結合，使用稀釋緩沖液K₂HPO₄沖洗層析柱至基線平衡，然后使用0.05-0.1mol/L的磷酸鹽溶液進行洗脫，收集得到的洗脫液，裝入半透膜，用ddH₂O透析，換水2-4次后，4℃透析過夜，收集樣本，即可得到高純度的砷螯合型免疫復合物。

優選的，所述免疫復合物或載體蛋白的結構中至少含有鋅指結構、巰基、半胱氨酸殘基中的一種，砷離子與免疫復合物或載體蛋白與鋅指結構或巰基或半胱氨酸殘基相結合。