[發(fā)明專利]適用于單分子測序的設(shè)備及對核酸分子進行測序的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201810608501.6
• 申請日: 2018-06-13
• 公開（公告）號: CN109082362A
• 公開（公告）日: 2018-12-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 邱創(chuàng)汎;潘詔智;蔡經(jīng)緯;陳柏樺;邱建豪
• 申請（專利權(quán)）人: 體學(xué)生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12M1/00
• 分類號: C12M1/00;C12Q1/6869
• 代理公司: 北京同立鈞成知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11205
• 代理人: 張曉霞;臧建明

1.一種適用于單分子測序的設(shè)備，其特征在于，包括：

至少一個納米井，其中所述至少一個納米井具有觀察區(qū)；

多個核酸固定部分，設(shè)置在所述觀察區(qū)中或鄰近所述觀察區(qū)；

多種類型的核酸片段，分別被固定到所述多個核酸固定部分；以及

至少一個聚合酶，設(shè)置在所述觀察區(qū)中。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的設(shè)備，其特征在于，所述觀察區(qū)的直徑介于10nm到500nm范圍內(nèi)，且所述觀察區(qū)的高度小于200nm。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的設(shè)備，其特征在于，所述多種類型的核酸片段是直線型核酸片段。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的設(shè)備，其特征在于，所述多種類型的核酸片段在長度上包括50個核苷酸到200個核苷酸。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的設(shè)備，其特征在于，所述至少一個聚合酶為一個聚合酶。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的設(shè)備，其特征在于，所述多種類型的核酸片段在長度上包括多于200個核苷酸。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的設(shè)備，其特征在于，所述至少一個聚合酶包括多個聚合酶，所述設(shè)備還包括位于所述觀察區(qū)中的多個聚合酶固定部分，且所述多個聚合酶被固定到所述多個聚合酶固定部分。

8.一種對核酸分子進行測序的方法，其特征在于，包括：

(a)提供至少一個納米井，其中所述至少一個納米井具有觀察區(qū)；

(b)將多種類型的核酸片段通過多個核酸固定部分固定到所述觀察區(qū)；

(c)向所述至少一個納米井中提供一個引物及多個經(jīng)標(biāo)記核苷酸，其中所述引物與所述多種類型的核酸片段中的一者在所述觀察區(qū)中形成引物-核酸片段復(fù)合體；以及

(d)通過使用聚合酶并將所述多個經(jīng)標(biāo)記核苷酸納入到所述引物-核酸片段復(fù)合體中來起始所述引物-核酸片段復(fù)合體的新生鏈合成反應(yīng),以形成新生鏈；以及

(e)通過檢測經(jīng)納入后所述多個經(jīng)標(biāo)記核苷酸的序列來確定所述多種類型的核酸片段的序列。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，還包括以下步驟：

(f)將所述新生鏈離解；以及

(g)重復(fù)步驟(c)到步驟(f)。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述觀察區(qū)的直徑介于10nm到500nm之間，且所述觀察區(qū)的高度小于200nm。

11.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述多種類型的核酸片段在長度上包括50個核苷酸到200個核苷酸。

12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其特征在于，步驟(c)還包括添加所述聚合酶。

13.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述多種類型的核酸片段在長度上包括多于200個核苷酸。

14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其特征在于，還包括將多個聚合酶通過多個聚合酶固定部分固定到所述觀察區(qū)，其中在步驟(d)中使用的所述聚合酶是所述多個聚合酶中的一者。

15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其特征在于，所述固定所述多個聚合酶的步驟是在步驟(c)之前執(zhí)行。

16.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其特征在于，還包括以下步驟：

(f)將所述新生鏈離解；以及

(g)重復(fù)步驟(c)到步驟(f)，其中在所重復(fù)的步驟(d)中使用的所述聚合酶是所述多個聚合酶中的一者。