[發(fā)明專利]一種西瓜品種蘇蜜9號種子純度的鑒定方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810607583.2
• 申請日: 2018-06-13
• 公開（公告）號: CN108707645B
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉廣;羊杏平;徐錦華;張曼;姚協(xié)豐;侯茜;任潤生;朱凌麗
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: C12Q1/6827
• 分類號: C12Q1/6827
• 代理公司: 南京業(yè)騰知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 32321
• 代理人: 鄭婷

本發(fā)明涉及一種西瓜品種蘇蜜9號種子純度的鑒定方法，首先提取西瓜組織的DNA，設(shè)計RAPD引物JAASRP1093，以蘇蜜9號的基因組DNA為模板，進行PCR擴增，將擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳，最后對電泳結(jié)果進行分析，以父母本樣品DNA的特異標(biāo)記作為對照，只有同時具有親本特異標(biāo)記的單株才可確定為蘇蜜9號雜交種。本發(fā)明人通過分子標(biāo)記的篩選，鑒定出1個具有共顯性標(biāo)記的RAPD引物JAASRP1093。這個RAPD標(biāo)記在多次重復(fù)中表現(xiàn)穩(wěn)定，可用于西瓜雜交種種子的純度鑒定，利于西瓜商品種子高效準(zhǔn)確的質(zhì)量控制。本發(fā)明的鑒定方法成本低、標(biāo)記穩(wěn)定、準(zhǔn)確性高，不受被測樣品環(huán)境的影響，且在整個生長季節(jié)都可檢測。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種西瓜種子純度的鑒定方法，尤其是一種利用RAPD分子標(biāo)記技術(shù)進行西瓜品種蘇蜜9號種子純度的鑒定方法，屬于作物育種技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

西瓜是一種重要的經(jīng)濟作物，由于其外形美觀、味甜多汁，深受消費者的喜愛。我國是西瓜生產(chǎn)大國。據(jù)統(tǒng)計，2013年，我國大約184萬公頃的栽培面積生產(chǎn)了731.9萬噸的西瓜產(chǎn)量，占全球西瓜栽培面積的52％及全球總產(chǎn)量的67％。在西瓜雜種制種過程中，母本系自交的種子常混雜于F₁中，嚴重影響種子的質(zhì)量和純度，給生產(chǎn)造成巨大的經(jīng)濟損失。因此，優(yōu)良F₁代雜種的遺傳純度快速、準(zhǔn)確鑒定成為在西瓜生產(chǎn)中最為迫切需要解決的問題之一。

西瓜雜交種子純度的傳統(tǒng)檢測方法目前主要有田間形態(tài)學(xué)鑒定和同工酶鑒定。但在整個生長期假雜種與真雜種之間田間形態(tài)的差異不是很明顯，需到成熟期對果實進行鑒定才比較準(zhǔn)確，耗時長、工作量大，受季節(jié)影響，費用昂貴。而同工酶分析易受到環(huán)境和所取材料部位的影響，費時費力，準(zhǔn)確度不高。

西瓜品種‘蘇蜜9號’是江蘇省農(nóng)科院蔬菜研究所以自交系SW082-1-1為母本，以自交系SW069-2-1為父本配制而成的小果型西瓜一代雜種。早熟，耐低溫弱光，果實橢圓形，瓤紅色，果皮底色淺綠色，覆深綠色窄條紋，果皮厚約0.5cm，中心可溶性固形物含量12.0％～13.2％，質(zhì)地脆沙，汁液多，纖維少，風(fēng)味佳，適宜長江中下游地區(qū)春季大棚栽培。為保證優(yōu)良品種產(chǎn)生最大的經(jīng)濟效益，需要一種快速、準(zhǔn)確、穩(wěn)定的檢測方法進行西瓜品種‘蘇蜜9號’的鑒定。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于解決現(xiàn)有技術(shù)中西瓜品種雜交種子純度鑒定方法存在耗時長、費用高、不夠準(zhǔn)確等缺陷，提供一種西瓜品種蘇蜜9號種子純度的鑒定方法，該鑒定方法能夠?qū)ξ鞴掀贩N蘇蜜9號種子的純度進行簡便快速、準(zhǔn)確可靠、低成本地檢測。

技術(shù)方案

一種西瓜品種蘇蜜9號種子純度的鑒定方法，包括如下步驟：

(1)提取西瓜品種蘇蜜9號的基因組DNA；

(2)設(shè)計RAPD引物JAASRP1093，以西瓜品種蘇蜜9號的基因組DNA為模板，進行PCR擴增，得到擴增產(chǎn)物；

所述RAPD引物JAASRP1093的核苷酸序列為5'-CCCGATTCGG-3'；

(3)將擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳檢測；

(4)對電泳結(jié)果進行分析，以父母本樣品DNA的特異標(biāo)記作為對照，只有同時具有親本特異標(biāo)記的單株才可確定為蘇蜜9號雜交種，否則為雜種。

步驟(4)中，RAPD引物JAASRP1093產(chǎn)生大小為260bp的母本特異標(biāo)記JAASRP1093₂₆₀，產(chǎn)生大小分別為625bp和1500bp的父本特異標(biāo)記JAASRP1093₆₂₅、JAASRP1093₁₅₀₀，只有同時具有親本特異條帶的單株才為真正的蘇蜜9號雜交種。