[發明專利]一種基于孔雀石綠與亞硫酸氫根加成產物的可逆比色探針及其制備、應用

有效

• 申請號: 201810606827.5
• 申請日: 2018-06-13
• 公開（公告）號: CN108822005B
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發明（設計）人: 李朝輝;孫遠強;屈凌波;楊冉;孟紅敏
• 申請（專利權）人: 鄭州大學
• 主分類號: C07C309/24
• 分類號: C07C309/24;C09K11/06;G01N21/78;G01N21/31
• 代理公司: 鄭州明德知識產權代理事務所(普通合伙) 41152
• 代理人: 李艷玲;郭麗娜

本發明屬于比色探針技術領域，具體涉及一種基于孔雀石綠與亞硫酸氫根加成產物的可逆比色探針及其制備和應用。該可逆比色探針結構式如下所示：。本發明比色探針靈敏度高、選擇性好、簡單便捷，而且可以重復使用，有望在生物醫學領域推廣使用。

技術領域

本發明屬于比色探針技術領域，具體涉及一種基于孔雀石綠與亞硫酸氫根加成產物的可逆比色探針及其制備和應用。

背景技術

葡萄糖是細胞代謝的主要碳源和能量來源，在細胞的自然生長過程中起著至關重要的作用，血液中的葡萄糖水平與糖尿病或低血糖等疾病密切相關。而在過去的幾十年里，糖尿病已經成為最大的公共健康威脅之一。因此，監測血糖含量對于預防和治療糖尿病或其他相關疾病具有重要意義。

目前，人們已經報道了許多葡萄糖檢測方法，比如熒光傳感方法、比色傳感方法、化學發光傳感方法和高效液相色譜法等。在這些分析方法中，比色法引起了人們的廣泛關注，除了準確、易操作、低成本等特點，比色法還可以通過肉眼觀察顏色變化來分析待測物，這樣需要更少的勞力，甚至不需要檢測設備。但是目前的比色探針大都是一次性消耗品，具有循環可重復利用能力的葡萄糖可逆比色探針還沒有，不利于可持續發展。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種基于孔雀石綠與亞硫酸氫根加成產物的可逆比色探針及其制備和應用，該可逆比色探針可以實現重復使用。

為實現上述目的，本發明所采用的技術方案為：

一種基于孔雀石綠與亞硫酸氫根加成產物的可逆比色探針，結構式如下所示：。

基于孔雀石綠與亞硫酸氫根加成產物的可逆比色探針的制備方法，步驟如下：1）取原料孔雀石綠和亞硫酸氫鹽；

2）將孔雀石綠和亞硫酸氫鹽加入磷酸鹽緩沖液（濃度10mmol/LPBS）中，混合后孔雀石綠濃度為20μM，亞硫酸氫鹽的濃度為25μM，室溫下反應3min，得到基于孔雀石綠與亞硫酸氫根加成產物的可逆比色探針溶液。

所述孔雀石綠與亞硫酸氫根的物質的量比為1：（1-1.25）。

所述亞硫酸氫鹽為亞硫酸氫鈉、亞硫酸氫鉀或亞硫酸氫銨。

可逆比色探針在檢測樣品中葡萄糖方面的應用。

具體應用時，先將待測樣品與葡萄糖氧化酶混合孵育（孵育在37℃下進行30min）得到反應溶液，然后將反應溶液加入可逆比色探針溶液中，然后分別測試反應后的顏色和紫外可見光譜變化。

實驗發現：隨著待測樣品中葡萄糖含量的增多，將反應溶液加入可逆比色探針溶液中后逐漸從無色變成藍色，紫外可見光譜的變化為：618 nm處的吸光度隨著葡萄糖含量的增多而增大。

本發明以孔雀石綠與亞硫酸氫根發生1, 4-加成反應得到的加成產物為比色探針，研究發現，葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化作用下能夠產生雙氧水H₂O₂，而H₂O₂能夠氧化孔雀石綠與亞硫酸氫根的加成反應產物使該產物重新變回藍色的孔雀石綠，如果將待測樣品與葡萄糖氧化酶混合孵育后的反應溶液加入探針溶液中探針溶液由無色變為藍色，說明加成反應產物變回孔雀石綠，此時表明反應溶液中含有葡萄糖經葡萄糖氧化酶催化后的H₂O₂，進一步說明待測樣品中含有葡萄糖，如此就可以根據H₂O₂引起的從無色到藍色的顏色變化或者相對應的紫外可見吸收光譜變化來間接檢測葡萄糖。本發明的比色探針在檢測過葡萄糖之后，還可繼續向探針溶液中加入充分的亞硫酸氫根，將探針反應后的產物孔雀石綠重新變回孔雀石綠與亞硫酸氫根的加成產物，從而實現探針的多次重復使用。