[發(fā)明專利]一種新型提純汞螯合型免疫復(fù)合物方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810605511.4
• 申請(qǐng)日: 2018-06-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108982864A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-12-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張積仁;陳振展;黃祥魁;黃秋艷
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東騰湃醫(yī)療股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/579
• 分類號(hào): G01N33/579;G01N33/531;G01N1/34;G01N21/31
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11548
• 代理人: 李靜

1.一種新型提純汞螯合型免疫復(fù)合物方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一：先將螯合劑溶液配制完成，再將螯合劑溶于溶劑中，即可得到螯合劑溶液；

步驟二：取適量載體蛋白，將載體蛋白加入到硼酸鹽緩沖溶液中，即可制得載體蛋白溶液；

步驟三：將已制得的螯合劑溶液加入到載體蛋白溶液中，置于恒溫水浴中并攪拌均勻，恒溫水浴，即可得到混合液；

步驟四：自制半透膜，向光滑、潔凈、干燥的250ml錐形瓶中倒入火棉膠溶液，小心轉(zhuǎn)動(dòng)容器，使火棉膠溶液均勻附在壁上成一薄層，傾出多余的溶液，然后將容器倒置，進(jìn)一步將多余溶液流盡和使溶劑乙醚揮發(fā)掉，直至用手指輕觸所形成的膜而不粘著方可，然后往容器中加水至滿為止，遇水后在乙醚未蒸發(fā)干的地方會(huì)發(fā)白，制成半透膜，將瓶口上的膜脫開(kāi)，并在膜與容器壁間注入水，使膜自動(dòng)脫離瓶壁，輕輕取出制成的袋形半透膜，檢查是否有孔洞，如果有則不能使用，應(yīng)重新制作，若以膜袋浸入不同濃度的乙醇水溶液中，則可得到不同滲透度的膜，按此法制作的半透膜不使用時(shí)，則應(yīng)存放于水中，以免損壞；

步驟五：預(yù)提純除去未螯合的汞離子和其它雜離子，在將3-5組半透膜按內(nèi)外次序排列后加入EDTA溶液煮沸10min，棄廢液后用ddH₂O沖洗，重復(fù)該步驟2-4次，步驟三中的混合液裝入處理后的多層半透膜中，用ddH₂O透析換水，4℃透析過(guò)夜之后，收集液體；

步驟六：除去未結(jié)合的載體蛋白，取未使用的復(fù)式層析柱，用稀釋緩沖液沖洗層析柱的管路，在上層層析柱中裝入能與汞離子特異性結(jié)合的填料，在下層層析柱中裝入能與載體蛋白特異性結(jié)合的填料，裝柱后，繼續(xù)使用稀釋緩沖液K₂HPO₄平衡層析柱，待層析柱平衡后，用稀釋緩沖液K₂HPO₄稀釋步驟四中的樣品，然后上柱，載體蛋白與填料特異性結(jié)合，使用稀釋緩沖液K₂HPO₄沖洗層析柱至基線平衡，然后使用0.07-0.1mol/L的磷酸鹽溶液進(jìn)行洗脫，收集得到的洗脫液，裝入半透膜，用ddH₂O透析，換水2-4次后，4℃透析過(guò)夜，收集樣本，即可得到高純度的汞螯合型免疫復(fù)合物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的汞螯合型免疫復(fù)合物，其特征在于:所述免疫復(fù)合物或載體蛋白的結(jié)構(gòu)中至少含有鋅指結(jié)構(gòu)、巰基、半胱氨酸殘基中的一種，汞離子與免疫復(fù)合物或載體蛋白與鋅指結(jié)構(gòu)或巰基或半胱氨酸殘基相結(jié)合。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的汞螯合型免疫復(fù)合物，其特征在于:所述載體蛋白為抗體蛋白、脂蛋白、血紅蛋白、核抗原、異種血清抗原、病毒、細(xì)菌、原蟲(chóng)、蠕蟲(chóng)或免疫球蛋白之中的一種。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的汞螯合型免疫復(fù)合物，其特征在于，所述汞離子通過(guò)螯合劑與載體蛋白結(jié)合后再與能和載體蛋白特異性結(jié)合的抗體結(jié)合，所述螯合劑為ITCBE、EDTA、多磷酸鹽、氨基羧酸、1,3-二酮、羥基羧酸中的一種。

5.一種定性檢測(cè)汞螯合型循環(huán)免疫復(fù)合物的方法，其特征在于，以已知含量的權(quán)利要求1所述的汞螯合型免疫復(fù)合物作為標(biāo)準(zhǔn)品，采用以下方法之一對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)：酶聯(lián)免疫法、酶聯(lián)免疫與原子吸收光譜結(jié)合法、酶聯(lián)免疫與電感耦合等離子體質(zhì)譜結(jié)合法、提純免疫復(fù)合物與原子吸收光譜結(jié)合法、提純免疫復(fù)合物與電感耦合等離子體質(zhì)譜結(jié)合法、電泳與酶聯(lián)免疫或原子吸收光譜或電感耦合等離子體質(zhì)譜結(jié)合法。