[發明專利]基于銀納米簇復合物的三聚氰胺比率熒光探針的制備方法

有效

• 申請號: 201810604913.2
• 申請日: 2018-06-13
• 公開（公告）號: CN108641708B
• 公開（公告）日: 2019-07-12
• 發明（設計）人: 桂日軍;付永鑫;金輝;卜祥寧
• 申請（專利權）人: 青島大學
• 主分類號: C09K11/06
• 分類號: C09K11/06;C09K11/58;C07D311/82;G01N21/64
• 代理公司: 青島高曉專利事務所(普通合伙) 37104
• 代理人: 張世功

1.一種基于銀納米簇復合物的三聚氰胺比率熒光探針的制備方法，其特征在于，該方法具體包括以下步驟：

(1)制備DNA穩定的銀納米簇：在0℃下，向1毫升二次蒸餾水中加入一定量的硝酸銀溶液與DNA溶液，磁力攪拌20分鐘以形成均質混合液，然后加入新配制的硼氫化鈉溶液，在避光處劇烈攪拌反應20分鐘，所得產物溶液采用0.4微米的濾膜過濾，濾液經截留分子量為5000道爾頓的透析袋透析處理，以去除未反應的實驗原料，將透析袋中溶液進行旋蒸處理以去除90％溶劑，再進行冷凍干燥得到銀納米簇干樣，在4℃避光條件下儲存備用；

(2)制備銀納米簇/羅丹明6G復合物：將步驟(1)中制得的銀納米簇溶解在200微升二次蒸餾水中，加入100微升檸檬酸鹽水緩沖液混勻，再加入100微升不同濃度的羅丹明6G溶液，混合液在避光處反應30分鐘，產物溶液采用離心分離、乙醇洗滌和真空干燥處理，得到銀納米簇/羅丹明6G復合物；

(3)將步驟(2)中制得的復合物分散在100微升檸檬酸鹽水緩沖液中，在避光處孵化30分鐘，分別測定不同羅丹明6G摩爾濃度下，復合物均質溶液的熒光發射光譜，優化雙發射熒光峰強度以確定銀納米簇與羅丹明6G的配比；

(4)在室溫和緩慢磁力攪拌下，向步驟(3)中制得的優化配比復合物均質溶液中加入15微升不同濃度的三聚氰胺溶液，繼續攪拌5分鐘，使其充分反應形成復合物與三聚氰胺的均質溶液，測定不同的三聚氰胺摩爾濃度下，復合物與三聚氰胺均質溶液的熒光發射光譜，擬合銀納米簇與羅丹明6G熒光發射峰強度比率與三聚氰胺摩爾濃度之間的線性關系，構建三聚氰胺比率熒光探針；

步驟(1)中所述的銀納米簇尺寸為6～12納米，硝酸銀、DNA和硼氫化鈉的摩爾濃度分別為5～10毫摩爾/升、200～600微摩爾/升和5～10毫摩爾/升；步驟(2)中所述的檸檬酸鹽水緩沖液pH為5.5～6.5，羅丹明6G摩爾濃度為0.1～2納摩爾/升；步驟(3)中所述的復合物溶液質量濃度為1～5毫克/毫升；步驟(4)中所述的三聚氰胺的濃度范圍為0.5～15微摩爾/升，檢測限為0.05～0.2微摩爾/升。