[發明專利]一種治療睡眠障礙益生菌制劑的生產方法及應用

在審

• 申請號: 201810604812.5
• 申請日: 2018-06-13
• 公開（公告）號: CN108823125A
• 公開（公告）日: 2018-11-16
• 發明（設計）人: 張勝剛;張瀟
• 申請（專利權）人: 山東巴元生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P1/04;A61K35/747;A61K9/48;A61K9/20;A61P25/20;C12R1/25;C12R1/225
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 李桂存

1.一種治療睡眠障礙益生菌制劑的生產方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將CICC-22164副干酪乳桿菌和CICC-20261植物乳桿菌分別加入培養基2毫升，制成凍干管菌懸液，分別取1.5ml菌懸液分別接入到10ml培養基中，進行菌種擴大培養，分別得到擴大菌液；

（2）然后將兩種擴大菌種液同時接種到三角瓶中，即一級種子培養基100毫升，分別接入擴大菌液為1毫升，進行培養，得到一級菌種液；

（3）將一級菌種液液1公斤接種到100公斤種子罐培養基中培養，得到種子罐菌種；

（4）將種子罐菌種3公斤接種到100公斤發酵罐中的培養基中發酵培養，培養條件為：發酵溫度37℃，攪拌轉速120轉/分鐘，發酵時間24小時，罐壓保持0.05兆帕；

（5）發酵完畢后，將發酵液離心，離心速度為12000轉/分鐘，得到濕菌泥和離心后的發酵液，濕菌泥進行冷凍干燥，制成凍干菌粉，離心后的發酵液低溫真空濃縮制成代謝物干燥粉，凍干菌粉與代謝物干燥粉復配，制成成品益生菌制劑。

2.根據權利要求1所述的生產方法，其特征在于，步驟（1）所述的菌種擴大培養的培養基為：葡萄糖15克、蛋白胨16克、牛肉浸粉7克、乙酸鈉2克、吐溫80 1ml、尿素1克、自來水1000毫升；

步驟（2）中一級種子培養基為： 葡萄糖30克、蛋白胨8克、牛肉浸粉6克、玉米漿1克、乙酸鈉2克、吐溫80 1ml、自來水1000毫升；

步驟（3）中種子罐培養基各組分的重量百分比：葡萄糖8%、蛋白胨1%、尿素0.5%、磷酸氫二鉀1%、玉米漿1%、乙酸鈉0.5%、吐溫80 0.4%、聚葡萄糖2%、聚醚消泡劑0.1%、自來水85.5%。

3.根據權利要求1所述的生產方法，其特征在于，步驟（4）中所述的發酵罐中的培養基各組分的重量百分比為：葡萄糖12%，蛋白胨1%、海藻糖2%、聚葡萄糖3%、低聚異麥芽糖10%、乙酸鈉2%、吐溫80 0.2%、馬鈴薯淀粉5%、共軛亞油酸0.5%、無水氯化鈣0.3%、硫酸鎂0.5%，玉米漿3%，聚醚消泡劑0.1%，自來水60.4%。

4.根據權利要求1所述的生產方法，其特征在于，步驟（5）中所述的濕菌泥進行冷凍干燥的步驟為：

（1）懸菌液的制備:首先取配方中的水1500毫升加熱至50℃-55℃，在攪拌下加入麥芽糊精50克，溶化后再加入配方中余下的水1500毫升，然后再加入配方中濕菌泥1000克，脫脂奶粉300克，蔗糖200克，98%的甘油100ml，低聚異麥芽糖300克（加入順序不分前后），充分25℃-35℃條件下攪拌30分鐘，即成為懸菌液，然后將該懸菌液放入30℃的恒溫室或箱中恒溫30分鐘；

（2）冷凍干燥前的預凍：將恒溫30分鐘的懸菌液分裝于凍干盤中，然后放入冷凍干燥機的預凍室內在零下30℃-35℃的條件下預凍3小時；

（3）真空干燥:將預凍好的料盤放入真空干燥室開始抽真空干燥，干燥條件為:真空度為2-5帕，溫度-45℃，干燥室溫度28℃，干燥時間45小時；凍干完畢后收集凍干料用無菌粉碎機粉碎成細度為100目的菌粉密封包裝，制成凍干菌粉。

5.根據權利要求1所述的生產方法，其特征在于，步驟（5）中所述的離心后的發酵液低溫真空濃縮的步驟為：濃縮條件，真空度0.06兆帕，溫度55℃-65℃，濃縮至膏狀，固形物含量80%，水分含量20%為止，然后取濃縮膏1000克，加入藥用玉米淀粉200克混勻放真空干燥箱中干燥，干燥條件：真空度0.06兆帕，溫度55℃-60℃，干燥時間45小時，水分含量3%為合格，然后將其粉碎至100目的粉，密封包裝制成代謝物干燥粉。

6.根據權利要求1所述的生產方法，其特征在于，步驟（5）中所述的凍干菌粉與代謝物干燥粉復配的步驟為：取100目的凍干菌粉5克、代謝物干燥粉3克、微晶纖維素10克、藥用玉米淀粉20克，菊粉5克、硬脂酸鎂5克，將以上各物料放入固體攪拌混合機中混合均勻，然后在無菌條件下分裝入膠囊中，裝瓶或壓片即為益生菌制劑。

7.一種權利要求1-6之一所述的生產方法得到的益生菌。

8.一種權利要求7所述的益生菌在治療睡眠障礙中的應用。