[發明專利]一種效果優異鉛螯合型免疫復合物及其制備方法

在審

• 申請號: 201810598903.2
• 申請日: 2018-06-12
• 公開（公告）號: CN108663528A
• 公開（公告）日: 2018-10-16
• 發明（設計）人: 張積仁;常承瑜;張園園;王興國
• 申請（專利權）人: 廣東騰湃醫療股份有限公司
• 主分類號: G01N33/96
• 分類號: G01N33/96
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務所(普通合伙) 11548
• 代理人: 李靜

1.一種鉛螯合型免疫復合物，其特征在于，該鉛螯合型免疫復合物為以下一種：

鉛離子結合于免疫復合物形成的復合物；

或鉛離子結合于載體蛋白后與和該載體蛋白特異性結合的抗體所形成的復合物；

或鉛離子結合于免疫球蛋白后與載體蛋白結合形成的復合物。

2.根據權利要求1所述的鉛螯合型免疫復合物，其特征在于:所述免疫復合物或載體蛋白的結構中至少含有鋅指結構、巰基、半胱氨酸殘基中的一種，鉛離子與免疫復合物或載體蛋白與鋅指結構或巰基或半胱氨酸殘基相結合。

3.根據權利要求2所述的鉛螯合型免疫復合物，其特征在于:所述載體蛋白為抗體蛋白、脂蛋白、血紅蛋白、核抗原、異種血清抗原、病毒、細菌、原蟲、蠕蟲或免疫球蛋白之中的一種。

4.根據權利要求1所述的鉛螯合型免疫復合物，其特征在于:該鉛離子通過螯合劑與載體蛋白結合后再與能和載體蛋白特異性結合的抗體結合，所述螯合劑為ITCBE、EDTA、多磷酸鹽、氨基羧酸、1,3-二酮、羥基羧酸中的一種。

5.一種如權利要求1所述的鉛螯合型免疫復合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1：先將螯合劑溶液配制完成，再將螯合劑溶于溶劑中，即可得到螯合劑溶液；

S2：取適量載體蛋白，將載體蛋白加入到硼酸鹽緩沖溶液中，即可制得載體蛋白溶液；

S3：將已制得的螯合劑溶液加入到載體蛋白溶液中，置于恒溫水浴中并攪拌均勻，恒溫水浴4-30h，即可得到混合液；

S4：取來透析袋并在透析袋中加入EDTA-NaHCO3溶液煮沸，將透析袋固定在水箱的中部，并在水箱中加入足量的ddH2O，該ddH2O的體積與透析袋中溶液的體積比為90-95:1，重復該步驟3-4次，將S3中的混合裝入透析袋中，將透析袋置于恒溫水箱中，在恒溫水箱中加入足量的ddH2O，該ddH2O的體積與透析袋中溶液的體積比為90-95:1，透析過夜之后，將透析袋中的液體收集。

S5：在從透析袋中收集的液體中加入稀鹽酸溶液調整PH至7.0，緩慢滴入鉛離子溶液，滴入時不停震蕩，滴入完成后置于恒溫水浴中并攪拌均勻，恒溫水浴4-30h，然后重復S4一次，收集液體，得到鉛螯合型抗原。

S6：將S4中透析袋外的溶液與S5中收集的廢液混合在一起，向混合后的溶液中加入負載了納米二氧化鈦的活性炭進行吸附，并重復添加上述活性炭材料，再使用原子熒光法對處理過的溶液進行定量分析，當溶液中鉛離子富集程度達到0.1mol/ml，回收鉛離子再利用。

S7：在上述鉛螯合型抗原中加入能與載體蛋白特異性結合的抗體，反應后得到鉛螯合型免疫復合物。

6.如權利要求1所述的鉛螯合型免疫復合物在制備檢測鉛螯合循環免疫復合物的試劑或酶聯免疫試劑盒中的應用。

7.一種檢測鉛螯合循環免疫復合物的酶聯免疫試劑盒，其特征在于：該試劑盒包括如權利要求1所述的鉛螯合型免疫復合物的標準品。

8.如權利要求6所述的酶聯免疫試劑盒，其特征在于，該試劑盒還包括至少一種以下試劑：含有捕獲抗原抗體復合物的蛋白的包被液或含有捕獲鉛的抗體的包被液、酶標抗體。

9.一種定性檢測鉛螯合型循環免疫復合物的方法，其特征在于，以已知含量的權利要求1所述的鉛螯合型免疫復合物作為標準品，采用以下方法之一對樣品進行檢測：酶聯免疫法、酶聯免疫與原子吸收光譜結合法、酶聯免疫與電感耦合等離子體質譜結合法、提純免疫復合物與原子吸收光譜結合法、提純免疫復合物與電感耦合等離子體質譜結合法、電泳與酶聯免疫或原子吸收光譜或電感耦合等離子體質譜結合法。